猴头菇菌丝体和发酵液中多糖的含量测定.doc

猴头菇菌丝体和发酵液中多糖的含量测定
刘晓明1,闫云宇2,毕华3(1,3河北省食品药品检验院,2河北省医科大学第三医院,石家庄市 050000)
猴头菌Hericium erinaceus( Bull. Ex Fr.)又名猬菌、刺猬菌、小刺猴头、猴菇、猴头菇,隶属于担子菌门, 齿菌科[1],是著名的药食两用菌。猴头菇, 味甘,性平, 归脾、胃经。猴头菇多糖是猴头菌的主要活性成分之一, 具有免疫调节、抗肿瘤、抗衰老、降血脂、降血糖、抗突变、防辐射等作用[2]。猴头菇多糖制成的药物和保健品深受人们喜爱,开发前景广阔。目前,通过猴头菇子实体提取猴头菇多糖的方法研究较多,但猴头菇子实体的生长周期相对较长,本文研究的是发酵的方法获得的多糖,具有生长周期短,提取多糖速度快的特点。因此,液体深层发酵是开发猴头菇活性成分的有效手段。但是在发酵获得多糖的方法中,采用菌丝体提取多糖的研究较多,而积极利用发酵液提取多糖的方法较少报道,本实验通过对猴头菇菌丝体和发酵液提取的多糖含量进行比较,把发酵液也积极的利用起来,为猴头菇多糖更好的开发利用打下基础。
仪器与试药
紫外可见分光光度仪GBC Cintra 10(澳大利亚GBC公司),高效液相(美国Waters公司),旋涡混合振荡器(江苏海门其林医用仪器厂),恒温水浴锅(北京靖卫科学仪器厂)。
D-无水葡萄糖(中国药品生物制品检定所),蒽酮(北京金龙化学试剂有限公司),浓硫酸、95%乙醇、氯仿均为分析纯,猴头菇菌种为本实验室保存。
方法与结果
多糖的提取与精制:
猴头菇菌丝体的多糖提取[3]:取猴头菇成熟的菌丝体粉末20100505、20100506、20100507、20100508、20100509批各5g,加入20倍的水在80℃水浴中提取3小时,5 000
r/min离心10 分钟[2],取上清液。60℃下减压浓缩至30ml,过滤,滤液离心,取上清液,加入5倍体积的无水乙醇,静置过夜。抽滤,沉淀经无水乙醇、丙酮洗涤,置干燥箱中60℃干燥,得粗多糖。
:取猴头菇成熟的菌丝体发酵液20100505、20100506、20100507、20100508、20100509批,过滤,滤液离心,取上清液1000ml。60℃下减压浓缩至300ml,过滤,滤液离心,取上清液,加入5倍体积的无水乙醇,静置过夜。抽滤,沉淀经无水乙醇、丙酮洗涤,置干燥箱中60℃干燥,得粗多糖。
溶液的制备
葡萄糖对照品溶液的配制:精密称取105℃干燥至恒重葡萄糖标准品25mg用蒸馏水定容于50ml容量瓶中,•mL-1的对照品溶液,备用。
蒽酮-硫酸溶液的配制:取98%硫酸和蒸馏水适量,配制成72%硫酸液,精密称取蒽酮适量,用72%%的蒽酮-硫酸溶液。
吸收波长选择:取对照品适量配制成浓度为30mg•mL-1的溶液。再取样品猴头菇多糖适量配制成浓度约为30mg•mL-1的溶液。对照品、样品溶液各取1ml分别加入4ml %蒽酮-硫酸液,摇匀,置沸水中煮沸10分钟,取出迅速放冷,在黑暗中放置10分钟。显色后将葡萄糖对照品、猴头菇多糖样品在紫外分光光度仪中分别在450~750nm波长范围内扫描,结果猴