传染病实习报告.doc

实习报告
一、实习目的
1、通过对雏鸡接种未知的细菌和病毒,待鸡发病后进行病理剖检和细菌病毒的分离,掌握临床诊断、病理剖检和实验室试验相结合,同时掌握对一般传染病进行诊断,确定感染的细菌和病毒种类;
2、掌握传染病基本临床诊断过程和实验室诊断的基本策略和方法。
二、实习安排与流程
(一)实习安排
时间
地点
内容
2012年5月28日
逸夫楼4017
安排实习内容;分组;配制各种试剂和培养基;剖解雏鸡,观察脏器病理变化,并用病变脏器做组织触片;采集病变脏器;接种细菌至平板上分离培养;病料研磨匀浆,冻融。
2012年5月29 日
逸夫楼4017
细菌的染色镜检;细菌的纯培养;细菌的增殖培养;10%鸡红细胞制备;鸡胚接种。
2012年5月30日
逸夫楼4017
药敏试验;生化试验;照蛋,观察鸡胚存活情况。
2012年5月31日
江浦农场;逸夫楼4017
参观江浦农场;照蛋,观察鸡胚存活情况;观察生化试验结果;观察药敏试验结果。
2012年6月1日
逸夫楼4017
提取尿囊液;琼扩试验;血凝试验。
2012年6月2日
逸夫楼4017
观察琼扩实验结果;观察血凝试验结果。
2012年6月3日
逸夫楼4017
总结实习结果,撰写实板划线分离、肉汤接种
纯培养
生化实验
准备实验器材,配制试剂
药敏试验
观察动物发病情况
检测细菌
检测
病毒
病料匀浆反复冻融
接种鸡胚取尿囊液
鸡胚接种
血凝与血凝抑制
三、实习内容
上周五(5月25日):准备试验、接种病毒、照蛋等。
上周日(5月27日):接种细菌
周一(5月28日)
1、配制试剂:
(1)生理盐水:NaCl ,加去离子水至1000ml,121℃高压15min灭菌备用。
(2)PBS缓冲液:NaCl 8g、KCl 、Na2HPO4 、KH2PO4 ,
加去离子水至1000ml,121℃高压15min灭菌备用。
(3)LB固体培养基和液体培养基:胰蛋白胨10g、酵母提取物 5g、NaCl 10g、琼脂 15g,加去离子水至1000ml,121℃高压15min灭菌备用。
(4)氯化镁孔雀绿增菌液:取商品化粉末50g,1%琼脂粉,加去离子水1000ml,加热溶解,121℃高压15min灭菌备用。
(5)亚硒酸盐胱氨酸增菌液:亚硒酸盐胱氨酸粉23g,1%琼脂粉,加去离子水1000ml,混合加热至56℃,每个试管分装3ml,水浴加热至沸腾,再煮3~5min,冷藏备用。
(6)伊红美兰琼脂:取商品化粉末42g,加去离子水1000ml,按1%比例加入琼脂粉,溶解后121℃高压15min灭菌备用。待冷至50℃时,按20~25ml/块倾注无菌平板,静置至凝固,倒置备用。平板内培养基充分凝固吼,置温箱内烘干表面水分。
(7)麦康凯琼脂平板:取商品化粉末53g,加去离子水1000ml,按1%比例加入琼脂粉,溶解后121℃高压15min灭菌备用。待冷至50℃时,按20~25ml/块倾注无菌平板,静置至凝固,倒置备用。平板内培养基充分凝固吼,置温箱内烘干表面水分。
(8)SS琼脂:取商品化粉末62g,加去离子水1000ml,按1%比例加入琼脂粉,加热煮沸至完全溶解,冷却至50℃左右,摇匀,按20~25ml/块倾注无菌平板,静置至凝固,倒置备用。
(9)琼脂:8% NaCl 24g,PBS 300ml,琼脂粉
(10)%枸橼酸钠溶液:,加100ml水,溶解后121℃高压15min灭菌备用。
2、雏鸡临床症状观察:
体温升高,拉稀,粪便成白色糊状,有尿酸盐沉积,羽毛粗乱,腹部羽毛被粪便污染,呆立不动,精神萎靡,眼闭不睁,喜欢打堆,呼吸较急促。
3、剖检:人工发病鸡编号为1、2,进行解剖,观察各个组织脏器的肉眼病变,做好记录,同时用部分组织器官做触片经染色确定组织器官中是否有细菌存在。
(1)剪断病鸡的颈静脉处死,然后在大腿与腹壁之间各剪一剪,将大腿向两侧用力压,直至股骨头露出,使其平衡仰卧放置。在腹壁划开皮肤,将其向两边掀开,注意肌肉有无出血或坏死。沿腹壁至胸侧两边向前剪断肋骨,然后用力将胸骨向头部掀开,暴露胸腹腔,观察肝、脾、心及心包、肺、肾等器官的病变。
结果:肝脏稍有肿大,其他器官无明显病变。
(2)用火焰消毒过的剪刀剪下约1cm3的肝片组织在洁净的载玻片上触一下。自然干燥后革兰氏染色镜检。
染色步骤:火焰固定→滴加草酸铵结晶紫溶液,1~2min →水洗→滴加革兰氏碘液1~3min →水洗→ 95%酒精脱色约,~1min →水洗→石炭酸复红(沙黄水)10~30s