传染病 实习报告..doc

实习报告学院: 动物医学院课程: 兽医传染病学实习班级: 动医 10* 班学号: 1 71102** 姓名: ** 指导教师: 王先炜职称: 副教授实习时间 2013 年5月26 日至 2013 年5月 31日实习地点逸夫楼 4017 2013 年6月南京农业大学教务处制 1 实习报告一、实习目的 1. 以副猪嗜血杆菌病和蓝耳病为模型,学习传染病的临床诊断技术; 2. 通过对感染猪体内病毒和细菌的分离鉴定, 学习掌握细菌性猪病、病毒性猪病的实验室诊断方法。 3. 掌握畜禽传染病的临床诊断技术。 4. 掌握畜禽传染病实验室诊断方案的设计、诊断试剂的准备和检测结果分析判定。 5. 掌握畜禽细菌与病毒混合感染的病原分离与鉴定技术。 6. 掌握细菌药敏试验指导畜禽临床用药。二、实习安排时间地点内容星期一 5月26日白天逸夫楼 4017 诊断试剂的配制; 器皿的准备以及灭菌的处理星期二 5月27日白天逸夫楼 4017 病料的采取与处理; 细菌的涂片检查与分离培养星期三 5月28日白天逸夫楼 4017 病毒的分离接种(病料过滤和接种细胞);分离细菌镜检和增殖星期四 5月29日晚上逸夫楼 4017 细菌的生化试验、药敏试验和细菌鉴定; 观察接种细胞星期五 5月30日江浦农场参观学习星期六 5月31日下午逸夫楼 4017 病毒细胞病变观察、菌落鉴定三、实习内容日期: 星期:星期一白天王先炜老师讲解本周传染病学实习的主要内容和实习目的,包括传染病临床诊断的主要方法及及操作,实习过程中的注意事项,将 48名同学分为 12 小组,本组为第 12 组。分组进行实验器材的领取和准备。准备实验器材,配制试剂采集病畜病料检测细菌检测病毒平板划线分离、肉汤接种病料匀浆反复冻融纯培养药敏实验生化试验细胞接种细胞病变观察病毒的初步鉴定 2 实验准备(一)灭菌消毒用品: 手术刀片、手术刀柄、剪刀、大镊子、小镊子、剪刀、黄色枪头一盒、用锡箔纸包好小滤器、玻璃匀浆器、 离心管、 PCR 管。(二)其他用品: 解剖盘、酒精灯、酒精棉球、解剖刀、记号笔、注射器、染色缸、乳胶手套、接种环、载玻片、细菌涂布棒、倒置显微镜等。(三) 试剂及配制 平板(6块以上) 成分: TSA :8g琼脂粉: 去离子水 200 mL 121 ℃,15-20min ,冷却至 50℃左右, 加入 5mL的小牛血清, mLNAD 液体培养基(10管) 成分: TSB : 去离子水: 50ml 混匀后可分装小试管内(每管 3mL )121 ℃,15-20min 用之前每只试管加 1μL血清, 1μLNAD 血清:用前要灭能( 56℃,40min ) : NaCI 加入 50mL 去离子水,然后高压灭菌 :在50ml 的DMEM 液中加入 1ml 的血清和 1ml 的双抗(青、链霉素)(研究生配制); 缓冲液(一起配置): ?10*TE buffer (100ml) 1MTris-HCl buffer (PH=8 )10ml 500mM EDTA(PH=8) 2ml 定容至 100ml ,高压保存?1MTris-HCl (PH=8 )(100ml ) Tris 至80ml 去离子水,加 浓HCl ,定容至 100ml ,高压灭菌?500mM EDTA (PH=8 ) Na 2EDTA ?H 2O至80ml 去离子水,加 2gNaOH ,定容至 100ml (四) 倒TSA 平板将TSA 溶液高压后冷却至 60℃左右,加入小牛血清和 NAD 。然后将平板边沿用酒精灯外焰灼烧消毒,将TSA 溶液倒入平板中,均匀铺满整个平板,待其冷却凝固后, 标记好班级,组名和时间等备用。日期: 星期:星期二细菌学检查和病毒学检查病料取样。 : 取病猪肺脏(冰冻组织需充分解冻),用酒精棉球点燃消毒肺脏表面,无菌手术刀切口,将接种环伸入于肺脏肺泡内,无菌划线接种 TSA 平板。具体操作如下: 3 a)右手执笔式持接种环,在酒精灯火焰上灼烧接种环,待冷; b)左手抓紧琼脂培养基平皿,用手掌将平皿的底固定,用手指将平皿的盖略抬起一些,进行接种。或者,将平皿盖放在试验台上,尽量直立平皿靠近酒精灯火焰; c) 右手接种环在琼脂的一端涂布,划线时,接种环与琼脂表面是 30° -40 ° 的角度轻轻接触,利用腕力动作,切忌划破琼脂表面; d)接种完毕,盖好平皿盖,在平皿底玻璃上用记号笔注明接种时间,接种者等,然后将平皿的底朝上,放置在 37°温箱内培养 24-48 小时(培养后可出现多种菌落, 注意区分不同培养时间点不同类型菌类形态