多聚甲醛 4 多聚甲醛配置.doc

多聚甲醛 4%多聚甲醛配置

4%多聚甲醛配置:
(4%是指4g多聚甲醛固体溶于00mL PBS中) 1. 先配好PBS
2. 称取4g多聚甲醛固体
3. 将多聚甲醛放入PBS中水浴锅65℃加热3h
注意:,多聚甲醛容易挥发。上午使用,前一天下午配置;下午使用,当天上午配置。
,使用时要在通风橱中进行并配戴口罩
40g多聚甲醛固体→1L PBS 120g多聚甲醛固体→3L PBS 药品 PBS NaCl KCl Na2HPO4 12H2O KH2PO4 加三次水,1L定容取50只小鼠,1只小鼠注射20mL 4%的多聚甲醛溶液,共需1000mL≈,故要配置 1、5L的4%的多聚甲醛溶液
用量 1L 8g 从组织中提取总蛋白
组织匀浆
8mL裂解液
8mL RIPA+80μL PMSF(100×)+(100×) 1mL RIPA+10μL PMSF(100×)+(100×)

1. 裂解:取少量组织+600μL裂解液匀浆→4
℃振荡裂解45min→4℃离心12000r/min,离心15min
2. 稀释:取3μL上清+27μL无菌水→BCA试剂盒以A液:B液=50:1的比例混合→样品25μL+混合液200μL(设置三组平行对照) 温敷:37℃下温敷30min→→测蛋白浓度,
计算50μg/70μg对应体积和buffer体积→5×buffer,最大上样量
÷4=buffer体积
3. 变性:100℃煮沸10min,-80℃保存

组织总RNA提取
取小鼠肝组织50~100mg,加人1mL TrizolTM试剂,置于碾钵中快速研磨,样品体积不超过TrizolTM的10%。匀浆后的样本于室温孵育5min(使核蛋白复合物完全融解),