干旱盐碱胁迫下禾本科植物谷胱甘肽还原酶的活性.ppt

答辩人:关春龙
专业:生物工程
干旱、盐碱胁迫对苗期羊草GSH-Px活性的影响
指导教师:崔喜艳
吉林农业大学生命科学学院生物工程专业
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材料与方法
结果分析与讨论
结论与致谢
目录
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前言
羊草(Leymus chinesis)是多年生根茎型禾本科植物,具有无性繁殖能力强、生产力高、耐干旱、耐贫瘠、耐盐碱等生物生态学特性。谷胱甘肽过氧化物酶(GSH一PX)即谷胱甘肽:H2O氧化还原酶,分子量7600~9600,是一种水溶性四聚蛋自酶,其四个亚基处在一个平面上,且均有一个硒原子。具有催化活性的硒半胱氨酸位于酶分子178个氨基酸的第35位置上,在酶分子表面凹穴的活性部位,易于接触有机氢过氧化物并使其还原为有机羟化物;GSH一PX也可使H2O2变成H2O,以消除氧化胁迫。还原型谷胱甘肽(GSH)在催化反应中作为氢供体,氧化型谷胱甘肽(GSSG)在谷胱甘肽还原酶(GSSG一R)作用下,还原成GSH。
本研究以不同盐碱化程度及干旱程度下的羊草为试验对象,探讨羊草体内谷胱甘肽过氧化物酶对盐碱和干旱环境的活性,进一步揭示羊草抗干旱、盐碱及适应不同生镜的机制,力求为治理退化草地提供理论依据
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材料与方法
实验材料与材料培养

,RXZ型智能人工气候箱
材料培养方法与管理
1. 盆栽砂培
,出苗前每天上午8:00-8:30分浇去离子水50mm透灌,苗出齐后浇Hoagland营养液,照光时间12h(早7:00-晚19:00)。白天温度为28℃±2℃,夜间温度为16℃±2℃
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材料与方法
实验材料处理方法
出苗2周后,每天下午4:00-4:30分,对不同品种分别用盐碱水、PEG 。每天浇适量的水以补充蒸发耗分。不同时间处理的品种都有对照(CK),单纯用Hoagland全营养液透灌
实验材料取样方法
处理时间到后,选择均匀一致的3盆测定样品,分别剪取叶片,洗净根后液氮速冻,-20℃冰箱保存备用
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盐碱水、PEG6000的配置及浓度
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用0. 2 mo l /L pH 6. 2的磷酸缓冲液( 含 1 mmo l/L EDTA-2Na,5%的水溶性PVP)作为谷胱甘肽过氧化物酶(GSH一PX)的提取介质,偏磷酸为酶促反应的蛋白质沉淀剂, 二硫代对二硝基苯甲酸(DTNB ) 与 GSH显色反应3min, 在412 nm测定酶管和非酶管的OD值, 以测定谷胱甘肽过氧化物酶的活性。
测定项目与方法
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2. 测定时间
苗期;试验数据采用3个重复的平均值±标准差,用DNS软件进行数据分析
测定项目与方法
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测定项目与方法

-磷酸缓冲液(NaN3-PBS,): NaN3, EDTA-2Na, NaH2PO4。
:%HPO3,% EDTA-2Na,28%NaCl。
三氯乙酸(TCA