[优秀论文]IL-10诱导猪同种异体组织工程化软骨移植耐受的实验研究.pdf

上海第二医科大学
硕士学位论文
IL-10诱导猪同种异体组织工程化软骨移植耐受的实验研究
姓名:赵阳
申请学位级别:硕士
专业:免疫学
指导教师:葛海良

.诱导猪同釉舅体组织工程化软骨移檬裂受的实验磷究中文摘要方法:分离制各小型猪软骨缎脆,经体外培葵扩壤屠与垒锈树料定量检测重组猿卧谌砉窍赴械谋泶铩6蘖蘄戆挪铡经丝裂原刺曩的:本职究卷探讨缝织王程化软嚣在同静异体猪体内麴尘长状提释免疫排斥梳理瓣基础上,究隆猪粒菇ㄆ湔婧吮泶镌靥澹癫旎F庾链骨细胞效率及目的纂困的表达,测定莺组一蛋白的生物活性和诱导免疫耐受的作用,为基因转染的同种异体软骨细胞构建组织工程化软骨组织及其临床应用混合,构建缀绞工耧他软骨组绒,接种街职萏逯砥は拢志T谝浦步又趾蟮第堋周、芎周各时间段取出组织工程化的软骨,组织固定,石蜡包埋,通过组织病理和免疫组化的方法,观察、检测同种异体软骨组织的生长和兔疫搀斥情况。使用快速克隆载体,遁过—鄯椒ň郝⌒⌒椭鞩猯基因,然选、鉴定蜃经测彦涯实。经双酶甥嚣受克臻摹《冀核表达矮鞍。构建真核表达载体。使稍作为报告基函,通道H臼约磷H猪原代软骨细胞,利用荧光湿微镜和观察转染效率和绿色荧光蛋白的表达。进褫将一基因转染猪原代软骨细胞,遴过—縀的方法,定性謦Ⅱ激瀵栊熬分泌浒玖Γ舛ㄗ;蚪涎в悍置谙瑊卜的生物学活住,检溯转麓燎阁庀赴贗—盏枷卤泶锩閏喾钟的情况,混合淋巴细胞一软骨细胞反应鼵笏葑狪基因软骨细臌对闹种异体淋巴细胞的刺激强度。结果:分离零譬到的供体软嚣缨腿,体夕黎天鬃,生长款蹙,乓渥会居注射至受体猪残下,呔影锱焐K踅谧唇瞎欠祺纬伞>迪迈癫旖骨结节照典蓬的软臀组织形态,软臂结节周围有萌露韵爨僚细胞漫润。免痰组化表明组织工程化软骨可合成并分泌软骨组织特异性的型胶原,但同时第苁喾钟杓从斜泶铮恋周时喾肿颖泶锛崆垦粜浴R浦埠周移提供理论依据。上海第二医科大学级顾毒可弦德畚
植物消失。经双酶切和测序鉴定,成功地克隆了小型猪颍⒐êü庀晕⒕倒鄄斓铰躺ü獾鞍椎谋泶铮的转录,ú舛ㄗH救砉窍赴嘌锨逯械鞍缀浚∈笔北泶锪孔罡撸/。透明质酸酶可提高转染效率。检测表明转虻娜砉窍赴赊卓笽—盏嫉腗分子表达,其细胞培养上清具有抑制碳さ腜置贗—纳镅Чδ堋混合淋巴细胞一软骨细胞反应发现,一基因转染可明显抑制猋诱导的软结论:猪同种异体软骨细胞经组织工程化可在组织不相容的受体体内形成软骨组织,但新生软骨组织诱导机体发生免疫排斥反应,移植物在同种异体体内仅能存活五周。成功克隆猪蛑剩獻基因转染软骨细胞表达,转基因软骨细胞免疫原性降低,分泌的重组一蛋白具有抑制活化赴置贗—纳镅Чδ埽崾綢具有有利于延长移植物存活期、抑制免疫排斥的作用。本实验为进一步使用转基因软骨细胞构建组织工程化软骨,并移植到同种异体体内提供实验和理论依据。关键词:小型猪;软骨细胞;同种异体移植;组织工程;基因转染:一;可持续煲陨希現舛ㄗH拘饰.%。。免疫耐受上海第二医科大学级硕士研究生毕业论文
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子,促进受体排异供体的软骨细耐,因此必须使软骨细胞在分泌胶原基质包围好的效果,但由于其造成新自体的创伤和自体软酋钼胞来源的困难限制其应用器官和细胞移植是现代医学科学的重要领域。用健康的细胞、组织和器官代替病变组织器官,重建其正常的生理功能,一直是医学研究和应用追求的目标。软骨病损是临床常见的疾病之一,如由创伤、感染、自身免疫、肿瘤等因素引起的各种关节表面疾患;耳廓软骨、鼻、喉软骨的缺损、畸形;以及儿童骨骺生长板的创伤、早闭、坏死等。成人软骨组织的修复和再生能力较弱,因此软骨缺损组织学上软骨组织可分为透明软骨绻亟谌砉恰⒗软骨、鼻软骨和气管软骨⒌匀砉缁嵫崛砉呛投砉绨朐掳三类,均是只含软骨细胞的单一组织,无血管、淋巴管和神经,营养主要靠组织液的渗透。在组织结构上,软骨细胞被包在软骨陷窝内,软骨囊成为其天然屏障,可阻挡免疫细胞的攻击。因此软骨细胞具有抗原性弱,不易被机体免疫系统排斥等特点。世纪年代,随着生物材料和细胞生物学的发展,组织工程学得到迅速发展,利用组织工程技术为修复软骨病损提供了一个新思路,如何获取足够量的种子细胞是该技术的关键问题之一。自体软骨细胞移植虽已经用于临床并取得良。而软骨细胞在体外培养随着代数的增加,出现如成纤维样的“反分化”现象,失去了软骨细胞的功能【俊R虼瞬豢赡苡锰逋饫┰龅酱罅