实验七 实验注意事项.ppt

实验原理磺基水杨酸对脯氨酸有特定反应,当用磺基水杨酸提取植物样品时,脯氨酸便游离于磺基水杨酸溶液中。然后用酸性茚三酮加热处理后,茚三酮与脯氨酸反应,生成稳定的红色化合物,再用甲苯处理,则色素全部转移至甲苯中,色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。在520nm波长下测定吸光度,即可从标准曲线上查出脯氨酸的含量。脯氨酸的测定脯氨酸的测定(一):植物叶片。:﹪酸性茚三酮溶液配制:·L-1磷酸中,搅拌加热(70℃)溶解,贮于冰箱中。(配置的酸性茚三酮溶液仅在24h内稳定,因此最好现用现配。)3%磺基水杨酸配配制:3g磺基水杨酸加蒸馏水溶解后定容至100ml。100μg·mL-1脯氨酸标准母液配制:精确称取20mg脯氨酸,倒入小烧杯内,用少量蒸馏水溶解,再倒入200ml容量瓶中,加蒸馏水定容至刻度(为100μg·mL-1脯氨酸母液)。冰醋酸;甲苯。(二)实验步骤1.   脯氨酸标准曲线的制作用100μg·mL-1脯氨酸母液配制成0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10μg/mL的标准溶液。取标准溶液2mL,然后向各管分别加入2ml3%的磺基水杨酸溶液,﹪酸性茚三酮试剂,在沸水浴中加热1h,溶液即呈红色。冷却后加入4ml甲苯,摇荡30秒钟,静置片刻,取上层液,以甲苯溶液为空白对照,在520nm波长处测定吸光度(A)值。OD值为纵坐标,脯氨酸浓度(μg/mL)为横坐标绘制标准曲线。,分别置大试管中,然后向各管分别加入5mL3%的磺基水杨酸溶液,在沸水浴中提取10min(提取过程中要经常摇动),冷却后3000r/min离心10min。取上清液待测。,加入2mL去离子水,﹪酸性茚三酮试剂,在沸水浴中加热1h,溶液即呈红色。冷却后加入4mL甲苯,摇荡30秒钟,静置片刻。用吸管轻轻吸取上层脯氨酸红色甲苯溶液于比色杯中,以甲苯溶液为空白对照,在520mm波长处测定吸光度(A)值。从标准曲线上查出样品测定液中脯氨酸的含量,按下公式计算样品中脯氨酸含量:X×提取液总量(mL)脯氨酸含量(μg·g-1Fw)=—————————————————样品鲜重(g)×测定时提取液用量(mL)公式中:X-从标准曲线中查得的脯氨酸含量(μg/mL)(三)计算结果依据回归方程式计算得到脯氨酸含量(μg/mL)相对电导率测定取根系或植物叶片,自来水洗净,蒸馏水冲洗干净,吸干表面水分。秤取1g,剪成长约1cm小段。将材料装到30ml指形管内,加入去离子水15ml,抽真空至材料下沉,室温放置1~2