第十一章 免疫学诊断.ppt

免疫学诊断技术
包括 体液免疫检测技术——血清学技术
细胞免疫检测技术
第一节体液免疫检测技术 ——血清学试验(抗原抗体试验)
种类:



——新技术


异嗜性抗原与免疫血清之间
交叉性
肠道杆菌与免疫血清之间
解决办法:
将动物免疫血清中的多克隆抗体通过吸收试验,制成单因子血清
应用杂交瘤技术制备单克隆抗体

PH T 370C
Ag+血清(Ab) Ag-Ab复合物
PH<3 T>600C
利用抗原抗体特异性结合反应的可逆性规律,建立亲和层析技术,纯化免疫纯的抗原或抗体
亲和层析技术提取免疫纯抗体示意图

第一阶段反应——形成Ag-Ab复合物
第二阶段反应——出现可观察的现象
4. 浓度和比例
一定浓度范围,一定电介质存在下,二者比例适当

(1)免疫血清质量要好
注意:
-空腹采血
-防止细菌污染——用具灭菌,无菌操作
-防止溶血——用具灭菌后干燥,防止酒精与血接触
-保存好血清——加适量防腐剂,2-80C保存
(2)电解质
稀释抗原、%NaCl溶液(生理
盐水),但稀释禽类血清用6%~8%盐水更好。
作用:降低抗原抗体的电势,完成二步反应
(3)温度:40C~560C均可
温度低反应慢,温度高反应快。
最常用370C 30min
(4)PH值
稀释抗原、~,~
通常抗原抗体蛋白的等电点都在PH6以下,若抗原或抗体溶液PH接近等电点,自身就会凝聚,出现非特异性的凝集或沉淀反应
为了稳定PH,~(PBS)作抗原抗体稀释液
※因为抗原抗体反应结果受多因素影响,为了证实试验的准确性,故在试验中一定要设立阳性、阴性和空白对照

(一)沉淀试验
%NaCl
可溶性抗原+免疫血清出现沉淀现象
(血清蛋白、病毒) (抗体) 比例适合
沉淀原沉淀素比例不适合不出现沉淀现象
容易过多前带现象
(稀释)