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脯氨酸含量测定
在逆境条件下(旱、盐碱、热、冷、冻) ,植物体内脯氨酸( proline ,
Pro)的含量显著增加。植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植
物的抗逆性, 抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。 因此测定脯氨
酸含量可以作为抗旱育种的生理指标。 另外,由于脯氨酸亲水性极强,
能稳定原生质胶体及组织内的代谢过程, 因而能降低冰点, 有防止细
胞脱水的作用。在低温条件下,植物组织中脯氨酸增加,可提高植物
的抗寒性,因此,亦可作为抗寒育种的生理指标。
一、原理
用磺基水杨酸提取植物样品时,脯氨酸便游离于磺基水杨酸的溶液
中,然后用酸性茚三酮加热处理后,溶液即成红色,再用甲苯处理,
则色素全部转移至甲苯中, 色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。 在
520nm 波长下比色,从标准曲线上查出(或用回归方程计算)脯氨
酸的含量。
二、材料、仪器设备及试剂
(一)材料:待测植物(水稻、小麦、玉米、高粱、大豆等)叶片。
(二)仪器设备: 1. 722 型分光光度计; 2. 研钵; 3. 100ml 小烧杯;
4. 容量瓶; 5. 大试管; 6. 普通试管; 7. 移液管; 8. 注射器; 9. 水
浴锅; 10. 漏斗; 11. 漏斗架; 12. 滤纸; 13 剪刀。
(三)试剂
1. 酸性茚三酮溶液:将  茚三酮溶于 30ml 冰醋酸和 20ml6mol/L
磷酸( 8ml85% 磷酸定容至 20ml )中,搅拌加热( 70℃水浴 )溶解,
贮于( 4 度)冰箱中( 2-3 天有效);
(
2. 3 %磺基水杨酸: 3g 磺基水杨酸加蒸馏水溶解后定容至 100ml ; 密
封避光 )
3. 冰醋酸;
4. 甲苯。
三、实验步骤
1. 标准曲线的绘制
( 1)在分析天平上精确称取 25mg (10mg )脯氨酸( -20 度,现稀
释现用),倒入小烧杯内, 用少量蒸馏水溶解, 然后倒入 250ml(100ml)
。
容量瓶中, 加蒸馏水定容至刻度, 此标准液中每 ml 含脯氨酸 100μg
取此液 10ml 稀释至 100ml, 即成 10ug/ml 脯氨酸标准液。
( 2)各试管中试剂加入量:
0 1 2 3 4 5 6
标准脯氨酸量 0
蒸馏水 2 0
冰乙酸 2 2 2 2 2 2 2
酸性茚三酮 2 2 2 2 2 2 2
( 3)取 7 支试管按上表加入各试剂,每管在沸水浴中加热 40min 。
( 4)冷却后各试管准确加入 5ml 甲苯,振荡 30S,静置 10min ,使
色素全部转至甲苯溶液。( 5)用注射器轻轻吸取各管上层脯氨酸甲苯
溶液至比色杯中,以甲苯溶液为空白对照,于 520nm 波长处进行比
单位鲜重样品的脯氨酸含量( μg/g)= [X ×5/2]/ 样重 *10  *100%
色。
( 6)标准曲线的绘制:先求出吸光度值( Y)依脯氨酸浓度( X)而
变的回归方程式, 再按回归方程式绘制标准曲线, 计算 2ml 测定液中