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西黄丸抗肿瘤作用及其免疫清除功能的实验研究
[摘要] 目的:探讨西黄丸对荷瘤大鼠的抗肿瘤作用及其对荷瘤机体免疫清除功能的影响。方法:采用Walker256建立大鼠荷瘤模型,随机分为空白对照组、模型对照组、香菇多糖组、西黄丸低、中、高剂量组,每组10只。造模后连续治疗给药14 d。腹主动脉取血,取瘤,计算抑瘤率;采用流式细胞技术(FCM)检测外周血中CD3+,CD4+,CD8+T细胞及黏附分子B7-1(CD80)的含量;ELISA测定外周血IL-2,IFN-γ表达水平。结果:%;与对照组比较,模型组大鼠外周血中IL-2,IFN-γ水平及CD3+,CD4+,B7-1含量明显降低,差异有统计学意义(P<);与模型组比较,西黄丸高剂量组大鼠外周血中IL-2,IFN-γ水平及CD3+,CD4+,B7-1含量增高(P<)。结论:西黄丸可通过提高外周血IL-2,IFN-γ水平及CD3+,CD4+,B7-1含量,增强免疫清除功能,发挥其抗肿瘤作用。
[关键词] 西黄丸;Walker256乳腺癌细胞;荷瘤大鼠;免疫清除
[收稿日期] 2013-08-03
[基金项目] 大连市金州新区高新技术研究开发项目(2012-A1-046)
[通信作者] 梁文波,博士生导师,E-mail:dllwb@
[作者简介] 马杰,硕士研究生,Tel:(0411)87403952,E-mail: zlylmj@
西黄丸是抗肿瘤中成药的经典名方,由牛黄、麝香、乳香(醋制)、没药(醋制)组成。具有清热解毒、活血化瘀、软坚散结等功效,临床上常用于多种恶性肿瘤的治疗及辅助治疗[1]。目前研究报道主要为西黄丸的体外细胞实验和西黄丸辅助放化疗的抗肿瘤作用或西黄丸组方中单味中药活性成分的抗肿瘤作用研究等[2]。临床研究显示,西黄丸具有增强免疫、抗肿瘤、抗菌抗炎、镇痛等作用,但其具体作用机制尚不清楚。本实验采用动物体内实验,研究西黄丸对荷瘤大鼠的抑瘤作用及其对免疫清除相关因子的影响,探讨其发挥抗肿瘤作用可能的机制。
1 材料与方法
动物及瘤株清洁级Wistar大鼠,雌性,体重(200±20) g(60只),及体重(80±10) g(3只),均购自大连医科大学实验动物中心,许可证号SCXK(辽)2008-0002。Walker256乳腺癌细胞株购自中国科学院上海细胞库。
药品、试剂与仪器西黄丸(北京同仁堂科技发展股份有限公司制药厂,批号1040990);香菇多糖片(浙江普洛康浴天然药物有限公司,批号120501)。 CD80抗体(Biolegend公司);CD3,CD4,CD8a抗体(eBioscience公司);IL-2,IFN-γELISA试剂盒(上海朗顿生物技术有限公司);淋巴细胞分离液(天津灏洋生物制品科技有限责任公司)。电子天平PL203(瑞士Mettler-Toledo公司);FACSVantage流式细胞仪(美国Becton Dickinson公司);酶标仪ELX800(美国Bio Rid公司)。
荷瘤大鼠模型的建立及给药收集对数生长期Walker256乳腺癌细胞,制成单细胞悬液,调整细胞浓度为2×107个/mL,抽取1 mL细胞悬液接种于(80±10) g的Wistar大