小鼠肌酸激酶同工酶CK-MBELISA试剂盒.doc

小鼠肌酸激酶同工酶CK-MBELISA试剂盒.DOC小鼠肌酸激酶同工酶(CK-MB)ELISA试剂盒(用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内)原理本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗小鼠CK-MB单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的CK-MB与单抗结合,加入生物素化的抗小鼠CK-MB,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合,加入底物工作液显蓝色,最后加终止液硫酸,在450nm处测OD值,CK-MB浓度与OD值成正比,可通过绘制标准曲线求出标本中CK-MB浓度。试剂盒组成(2-8℃保存)酶标板(CoatedWells)96孔酶标抗体工作液(EnzymeConjugate)12ml10×标本稀释液(SampleBuffer)12ml20×浓缩洗涤液(WashBuffer)50ml标准品(Standards):1000ng/瓶2瓶底物工作液(TMBSolution)12ml第一抗体工作液(BiotinylatedAntibody)12ml终止液(StopSolution)12ml准备试剂与收集血样收集标本:血清、血浆(EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝)、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测,2-8℃保存48小时;更长时间须冷冻(-20℃或-70℃)保存,避免反复冻融。血清测定前用标本稀释液至少作1:5稀释(取40ul,加标本稀释液160ul,稀释5倍)。标准品液配制:,配成2000ng/ml的溶液。设标准管8管,第一管加标本稀释液900ul,第二至第八管加入标本稀释液500ul。在第一管中加入2000ng/ml的标准品溶液100ul混匀后用加样器吸出500ul,移至第二管。如此反复作对倍稀释,从第七管中吸出500ul弃去。第八管为空白对照。10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释(示例:1ml浓稀释液+9ml蒸馏水)。洗涤液:用重蒸水1:20稀释(示例:1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水)检测程序加样:每孔各加入标准品或待测样品100ul,将反应板充分混匀后置37℃120分钟。洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次,向滤纸上印干。每孔中加入第一抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。洗板:同前。每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。洗板