降低细胞内GSH浓度对乳腺癌细胞阿霉素敏感性的影响-病理学与病理生理学专业论文.docx

四川大学病理学与病理生理学硕士学位沦文中文摘要降低细胞内GSH浓度对乳腺癌细胞阿霉素敏感性的影响病理学与病理生理学专业研究生:韩晓群指导教师:王树人教授摘要抗肿瘤药物的毒副作用及肿瘤细胞耐药已成为当前制约肿瘤治疗的重要因素。抗肿瘤药物通过抑制肿瘤细胞分裂增殖过程中的某些环节而抑制或杀灭肿瘤细胞的同时,对机体中的一些正常组织和细胞也会产生损害,从而引起许多毒副作用。抗肿瘤药物的剂量越大,毒副作用也越强。此外,在长期应用抗肿瘤药物的过程中,肿瘤细胞会对抗肿瘤药物产生耐药性,从而影响抗肿瘤治疗的效果。肿瘤细胞产生耐药性的机制众多,其中最受关注的是肿瘤细胞的多药耐药性(multidrugresistance,MDR)。目前认为,MDR的主要机制与肿瘤细胞对抗癌药物的主动外排有关,(P—glyceprotein,P-gp)和多药耐药性相关蛋白(multidrugresistance-associatedprotein,MRP)。此外药物作用靶标如受体、酶等的改变,细胞防御系统的增强以及细胞DNA修复功能的增强等,与肿瘤细胞耐药性的产生也有着密切的关系。大量临床研究试图采用MDR调节剂逆转肿瘤细胞的耐药性,但效果并不理想。最新研究表明,细胞内还原型谷胱甘肽(reducedglutathione,GSI-I)水平对于肿瘤的发生、发展及肿瘤细胞耐药性的产生具有至关重要的作用。那么,改变细胞内GSH浓度是否可以改变肿瘤细胞对抗肿瘤药物的敏感性?肿瘤细胞内的GSH浓度在肿瘤细四川大学病理学与病理生理学硕士学付论文胞耐药机制中又发挥了何种作用?上述问题的阐明不仅具有明确的理论价值,而且具有一定的临床应用前景。我们首先应用不同浓度阿霉素(adriamyein,ADM)分别处理人乳腺癌阿霉素耐药和敏感细胞株(/S),采用MTT法检测两种细胞的生存率,并通过计算两种细胞的IC50(存活率为50%时的药物剂量)的比值来计算耐药细胞株的耐药倍数;选用谷胱甘肽耗竭剂马来酸--7,酯(diethylmaleate,DEM),以耗竭细胞内还原型谷胱甘肽,MTT法检测DEM处理前后,在ADM作用下,,,并计算DEM对耐药细胞的逆转倍数;采用荧光分光光度法同步检测细胞内GSH的耗竭程度,;同样,,检测DEM处理前后,在ADM作用下,,即其对ADM敏感性的变化,以及细胞内GSH的变化,以期从耗竭细胞内GSH的角度寻找一条增强肿瘤细胞的药物敏感性,逆转肿瘤细胞耐药性的新策略。结果表明,,在各种浓度ADM处理后,,,。。,细胞内GSH浓度下降(P<),但其对细胞生存率无明显影响;单独应用ADM也可使细胞内GSH浓度呈ADM浓度依赖性下降,而MCF-7/ADM细胞生存率与对照组相比亦无明显变化;DEM预处理细胞3小时后再给以不同2四川大学病理学与病理生理学硕十学位论文浓度ADM处理细胞,细胞内GSH浓度则大幅度下降,其下降程度大于DEM和ADM单独应用之和,且随着细胞内GSH浓度的减少,,与单独应用ADM相比,IC卯值由(+)mg/L下降至(+)mg/L,,,但其细胞生存率仍高于敏感细胞抹。,再以不同浓度的ADM处理细胞,细胞生存率及细胞内GSH亦均较单独应用ADM明显下降,提示降低敏感株细胞的GSH浓度亦使其对ADM的敏感性升高。相关性分析显示,/S细胞生存率与细胞内GSH浓度呈明显的正相关(P<)。本文的上述结果提示,肿瘤细胞内GSH的浓度与其药物敏感性有密切的关系,降低耐药肿瘤细胞内的GSH浓度可部份逆转其对阿霉素的耐药性;DEM耗竭细胞内GSH的作用与ADM具协同效应。其机制可能涉及干扰MRP和GST介导的细胞内药物外排;另一方面也可能通过改变细胞内氧化还原态而诱导肿瘤细胞凋亡,从而达到增强肿瘤细胞药物敏感性,逆转肿瘤