基因克隆程.pptx

基因克隆第一章绪论第二章基因工程的工具酶第三章基因工程载体第四章重组DNA导入受体细胞第五章目的基因的表达第六章基因文库技术第七章目的基因的分离技术参考书现代分子生物学与基因工程,李海英,化学工业出版社基因工程原理,吴乃虎,科学出版社基因工程,楼士林,科学出版社(21世纪高等教材)第一章绪论一、基因工程的概念(icengineering)1、基因操作、遗传工程、重组体DNA技术2、嵌合DNA、DNA嵌合体(DNAchimera)3、分子克隆(molecularcloning)基因克隆(genecloning)重组DNA(binantDNA)4、基因工程的操作步骤1、基因克隆的操作步骤:1)从复杂的生物有机体基因组中,经过酶切消化或PCR扩增等步骤,分离出带有目的基因的DNA片段。2)在体外,将带有目的基因的外源DNA片段连接到能够自我复制的并具有选择记号的载体分子上,形成重组DNA分子。3)将重组DNA分子转移到适当的受体细胞(亦称寄主细胞、宿主细胞),并与之一起增殖。4)从大量的细胞繁殖群体中,筛选出获得了重组DNA分子的受体细胞克隆。5)从这些筛选出来的受体细胞克隆,提取出已经得到扩增的目的基因,供进一步分析研究使用。2、基因表达的操作步骤:1)从复杂的生物有机体基因组中,经过酶切消化或PCR扩增等步骤,分离出带有目的基因的DNA片段。2)将目的基因克隆到表达载体上,导入寄主细胞,使之在新的遗传背景下实现功能表达,产生出人类所需要的物质。二、基因工程发展简史1972年,StanfordUniversity(ivy-coveredcampus),Berg,第一个体外重组的人工DNA分子(EcoRⅠ,SV40DNA,λDNA)1973年,Cohen,完成了DNA分子体外重组和扩增的全过程,基因工程诞生之年,是基因工程的创始人StanvardUniversity三、基因工程的巨大意义(一)利用微生物制药1、利用微生物生产胰岛素2、重组微生物生产生长激素3、重组微生物生产干扰素利用微生物生产胰岛素世界上有6000万糖尿病患者(胰脏产生的胰岛素不足),400万定期注射胰岛素在美国,每年人口增长率1%,糖尿病患者增长率5%-6%。每位患者每年需要3-5kg的胰脏组织,40头牛或50头猪1978年,2000L大肠杆菌培养液获得了100g胰岛素,相当于从1t猪胰脏中提取的产量。1980年,英国伦敦17位志愿者接受了基因工程胰岛素的注射。1986年,基因工程生产的胰岛素正式进入市场