细胞生长曲线的绘制实验报告.docx

细胞生长曲线的绘制实验报告实验五微生物生长量的测定及生长曲线的绘制一、实验目的?学习了解微生物生长量测定的方法?学习了解细菌生长曲线的绘制方法?学习掌握血细胞计数板的使用方法微生物生长量的测定?计数法重量法生理指标法 1、显微镜直接计数法?利用血细胞计数板计数? ?涂片计数 2、活菌菌落计数法 3、滤膜法细菌生长曲线将单细胞细菌接种到恒定容积的液体培养基中,不补充营养物或移去培养物,细菌以二分裂方式繁殖,以时间为横坐标,细菌数目的对数值为纵坐标,可画出一条反映细菌在整个培养期间菌数变化规律的曲线,称为生长曲线细胞生长曲线的测定一、实验目的掌握测定细胞生长曲线的方法。二、实验器具 24孔细胞培养板、微量加样器、eppendorf管、吸头、吸头盒、显微镜、细胞计数板、载玻片、盖玻片、吸管、试管架、普通显微镜、细胞悬液、%台盼蓝。三、实验方法 :首先在24孔细胞培养板内分别接种相同数量的细胞,计数并记录接种的细胞悬液密度,接种时间记为0小时。 :从接种时间算起,每隔24小时计数3孔的细胞密度,算出平均值。为提高准确率,对每孔细胞可计数2-3次,如此操作至第七天结束。 :以培养时间为横坐标、细胞密度为纵坐标,将全部结果在坐标纸上绘图,即得所培养细胞的生长曲线。 MTT实验实验材料: 1,5%FBS-L-DMEM,5x104个/ml细胞悬液,5mg/mlMTT溶液,DMSO,PBS,2,96孔板共7个,酶标仪,50ml离心管,离心管,μm滤膜,锡箔纸,MTT工作液实验步骤: 1,分别选取生长良好的P1、P3、P5代BMSCs消化后制备成细胞悬液,调整细胞密度为5x104/ml。接种到96孔板,每孔接种200μl细胞悬液进行培养。 2,培养16-48后,每天选择6个培养孔各自加入MTT溶液20μl,37℃继续孵育。 3,孵育4h后终止培养,吸出孔内上清,此时应该倾斜96孔板,用枪头小心的将上清液吸去,不可吸去下面的结晶颗粒,慢慢吸去。每孔加入150μlDMSO,室温振荡10min,使结晶充分溶解,于试验孔平行设不加细胞只加培养液的空白对照1孔。注意事项: 【1】1,两种方法分离小型猪骨髓间充质干细胞的比较分别取两组0,1,3代细胞,制成1x103的细胞悬液,接种到96孔板,每孔细胞悬液200微升,置37℃、5%CO2饱和湿度孵箱内孵育,各组每24小时分别取出4孔,每孔加入MTT20微升37℃孵育,4h后吸弃孔内培养液,每孔加入150微升分