实验八计数法绘制动物 细胞的生长曲线
指导教师:唐颖
掌握血细胞计数板的使用
掌握计数法测定细胞的生长曲线的一般方法。
2. 实验原理
典型的细胞生长曲线
生长曲线常用于测定药物等外来因素对细胞生长的影响。一般在对数生长期的1/3-1/2处加药。细胞计数的时间和次数则依实验目的而定。
血细胞计数板的使用
使用区域为白1~白4时:
细胞个数(个/ml)=白1~白4四格细胞总数÷4×104×稀释倍数
、用品
实验材料:Hela细胞
用品:
①仪器及用具
C02培养箱,倒置显微镜,血球计数板,培养瓶,试管,吸管,移液管,废液缸,培养细胞,专用盖玻片。
②试剂
培养基(RPMI 1640),小牛血清,Hanks液,%胰蛋白酶溶液,%台酚蓝染液。
4. 实验步骤
取生长良好接近汇合的细胞,用胰酶消化,用新培养基制成细胞悬液后计数。如是非贴壁细胞,则离心弃旧培养基后,换上一定量的新鲜培养基然后制成细胞悬液计数。
根据细胞计数结果按每个小方瓶5×104/ml。作传代培养接种细胞,共接种21瓶细胞。
24h后开始计数细胞,以后每隔24 h计数一次,每次取3瓶细胞,分别进行计数,计算平均值,连续计数7d。
根据细胞计数结果,以单位细胞数(细胞数/ml)为纵坐标,以时间为横坐标绘制生长曲线。
分别作两组实验,即10%血清和1%血清培养的细胞的生长曲线,并比较结果.
为减少消化时造成的误差,可以直接定量加入胰蛋白酶,充分消化后直接计数。
细胞接种的密度与细胞生长曲线的测量结果之间有什么关系?
为了尽量减少误差,应在哪些环节上多加注意。
实验八计数法绘制动物细胞的生长曲线 来自淘豆网m.daumloan.com转载请标明出处.
