凝集试验.doc

,通过对凝集结果的观察和记录,了解凝集的判定和对被检牲畜试验结果的判定。。操作步骤一、平板凝集反应(以布氏杆菌为例)(一)取洁净玻片一块,用玻璃铅笔划成五行小格,并标明待检血清的号码。(三)按表8-1滴加待检血清、抗原(将牛、羊、猪三型布氏杆菌悬浮于甘油浓盐水中,加入煌绿及结晶紫制成)和生理盐水(检查绵羊、山羊血清时,用12%浓盐水)。血清用前需放室温,使其温度达20℃左右。表8-1布氏杆菌的平板凝集反应成分试验组对照1234盐水被检血清抗原—————(三)用火柴棒自血清量最少格起,依次往前搅拌,使血清与抗原混匀,每份血清用一根火柴棒。(四)混合完毕后,将玻片置于凝集反应箱上均匀加温,或放于离火焰稍高处,微微加温至30℃左右,3~5分钟内记录反应结果。(五)按下列标准记录反应强度++++:出现大的凝集块、液体完全透明。+++:有明显凝集块、液体几乎完全透明,即75%凝集。++:有可见凝集片,液体不甚透明,即50%凝集。+:液体混浊,有小的颗粒状物,即25%凝集。-:液体均匀混浊,无凝集物。牛、,而绵羊、,判为阳性反应;牛、,绵羊、。大规模检疫时,允许只用两个血清量作试验,牛、马、,猪、山羊和绵羊、。如用两个血清量作试验,任何一个血清量出现凝集时,均需用四个血清量重检。(六)每次试验须用标准阳性血清和阴性血清作对照。二、试管凝集反应(一)每份血清用4支试管(1×8cm),另取对照管3支。如待检血清多时,只设一份对照组。(二)按表8-2,%石炭酸生理盐水,将被检血清稀释成四个稀释度。第五管中不加血清,设抗原对照。第六管中加1:。第七管中加1:。(三)%(每ml含菌8亿)。(四)各管加抗原后,将各管充分混匀,放37℃温箱中感作4~10小时,取出后放室温18~24小时,然后观察并记录结果。(五)检查猪、羊、狗时血清稀释度为1:25,1:50,1:100,1:200;绵羊、山羊血清用10%浓盐水稀释。牛、马和驼骆血清稀释度为1:50,1:100,1:200,1:400,大规模检疫可只用两个稀释度,即狗、猪、羊为1:25,1:50;牛、马、骆驼为1:50和1:100。判定结果时用“十”表示反应强度:++++:液体完全透明,菌体完全被凝集呈伞状沉于管底,振荡时,沉淀物呈片状、块状或颗粒状(即100%的菌体被凝集)。+++:液体略混浊,菌体大部分被凝集于管底,振荡时呈片状或颗粒状(75%菌体被凝集)。++:液体不透明,管底有明显凝集片,振荡时有块状或小片絮状物(50%菌体被凝集)。+:液体不透明,仅管底有少许凝集,其余无显著的凝集块(25%菌体被凝集)。-:液体混浊,管底无凝集,菌体不被凝集,但由于菌体自然下沉,在管底中央