分子细胞实验课件feulgen及pas反应1章节.ppt

核酸的显示方法——Feulgen反应糖类的显示方法——PAS反应细胞化学实验实验目的与要求掌握Feulgen反应的基本原理;掌握PAS反应的基本原理;、蛋白质、酶、糖与脂类等的显示方法原理:利用一些显色剂与所检测物质中一些特殊基团特异性结合的特征,通过显色剂在细胞中的定位及颜色的深浅来判断某种物质在细胞中的分布和含量。是显示DNA的最典型的组织化学反应,为学者Feulgen于1924年发明,简称为Feulgen法。因对DNA的显示反应具有高度专一性,故常被用来显示细胞内DNA的分布情况。Feulgen反应(Feulgenreaction)稀HCl水解DNA,破坏嘌呤和脱氧核糖间的配糖键,并在脱氧核糖C1端形成游离的醛基,醛基和Schiff试剂结合,形成紫红色的化合物。因此在有DNA的部位,就会呈现除紫红色阳性反应。,时时摇动玻璃瓶,煮沸5min使之充分溶解,冷却至50℃时过滤,加入10ml1MHCl,冷至25℃时,(Na2S2O3)或无水亚硫酸(NaHSO3),在室温冷暗处至少放置24h(有时需2-3天),使其颜色退至淡黄色,密封瓶口,藏于暗处,最好保存于4℃冰箱中(可保存数月或更长时间)。,摇1min,用粗滤纸过滤,滤液应为无色;若液体颜色变为粉红色,便不能再用。Schiff氏试剂的制备利用强氧化剂使多糖产生游离的醛基,醛基和Schiff试剂结合,形成紫红色的化合物。因此在有多糖的部位,就会呈现除紫红色阳性反应。PAS(PeriodicAcidSchiff)反应的基本原理Feulgen反应制备鸭血涂片,甲醇室温固定5min,凉干;蒸馏水过一下;1mol/L盐酸(600C)水解8-10min;1mol/L盐酸(室温)1min;蒸馏水稍洗;置Schiff试剂中室温染色1小时左右;亚硫酸盐溶液洗3次,总时间为6min(或滴加在洋葱表皮上)自来水流水冲洗5min,蒸馏水过一下;用1%亮绿水溶液复染5-10秒;自来水流水冲洗2min(洋葱表皮注意不要被水冲洗掉)蒸馏水稍洗;甘油/PBS封片剂封片;显微镜观察。PAS反应制备鸭血涂片,甲醇室温固定5min,凉干;蒸馏水过一下;1%过碘酸水溶液浸泡10min;蒸馏水洗;Schiff试剂浸泡15min;亚硫酸盐溶液浸泡3次,共6min;自来水冲洗5min;蒸馏水浸泡1min;苏木精复染细胞核10-15min;自来水流水冲洗2min;蒸馏水稍洗;甘油/PBS封片剂封片;显微镜观察。