DNS法测定总糖和还原糖.doc

实验九总糖和还原糖的测定(二)──3,5-二硝基水杨酸法一、目的要求:掌握还原糖和总糖的测定原理,学习用比色法测定还原糖的方法。二、实验原理: 在NaOH和丙三醇存在下,3,5-二硝基水杨酸(DNS)与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色,在540nm波长处有最大吸收,在一定的浓度范围内,还原糖的量与光吸收值呈线性关系,利用比色法可测定样品中的含糖量。黄色  桔红色三、试剂和器材1、试剂(1)1mg/ml葡萄糖标准溶液:准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg,加少量蒸馏水溶解后,以蒸馏水定容至100ml,。(2)3,5—二硝基水杨酸试剂:,5—二硝基水杨酸并量取262ml2mol/LNaOH加到酒石酸钾纳的热溶液中(182g酒石酸钾纳溶于500ml水中),再加5g结晶酚和5g亚硫酸氢钠溶于其中,搅拌溶解,冷却后定容到1000ml贮于棕色瓶中。(3)碘-碘化钾溶液:称取5g碘,10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。(4)6NNaOH:称取120gNaOH溶于500ml蒸馏水中。(5)%酚酞指示剂。(6)6mol/LHCl溶液2、材料小麦淀粉或玉米淀粉。3、器材分光光度计,天平,水浴锅,电炉,试管若干等。四、操作方法 1、葡萄糖标准曲线制作取8支15mm×180mm试管,。试剂管号012345678葡萄糖标准液(ml)(ml)(ml)(mg),在沸水中加热5min,取出后立即用冷水冷却到室温,,摇匀。λ=540nm处测定吸光度以葡萄糖含量(mg)为横坐标,光吸收值为纵坐标,绘制标准曲线。2、(淀)粉,放在100ml烧杯中,先以少量蒸馏水(约2ml)调成糊状,然后加入40ml蒸馏水,混匀,于50℃恒温水浴中保温20min,不时搅拌,使还原糖浸出混。过滤,将滤液全部收集在50ml的容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度,即为还原糖提取液。3、(淀)粉,放在锥形瓶中,加入6mol/LHCl10ml,蒸馏水15ml,,取出1~2滴置于白瓷板上,加1滴I-KI溶液检