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四川动物年第卷第期. .
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斑马鱼胚胎显微注射基因分析平台的建立
陶大昌,陈惠娟,赵君,马用信
四川大学华西医院医学遗传研究室,成都
摘要:斑马鱼作为一种新的理想模式动物,已在发育生物学、环境毒理学和人类疾病及相关基因功能等研究中
得到广泛应用。本文就建立斑马鱼胚胎的显微注射基因分析平台进行了探究,并通过基因的抑制和过表达
实验验证了平台的可操作性,也对建立平台中所要注意的问题进行了讨论。
关键词:斑马鱼;显微注射;
中图分类号:.; 文献标识码: 文章编号:———

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斑马鱼,隶属鲤科短担尼
材料和方法
鱼属,原产于印度、孟加拉国,属小型热带鱼类,染色
体数为,成体长—,个体体型纤细,对食物. 材料
和水质要求不高,容易饲养。斑马鱼具有繁殖能力斑马鱼均为品系,由国家斑马鱼模式动物
强,产卵周期短,产卵量多,卵直径大;胚胎在体外发中心上海惠赠,解剖显微镜,显微注射器
育,胚胎发育速度快;早期胚胎完全透明,可随时观,,玻璃针,注射物
察发育过程;单倍体、雌核发育二倍体的制作和突变或。
体的获得均较容易;精子可以冷冻保存等特点,使其. 方法——斑马鱼的生长繁殖
非常适合于胚胎学和发育遗传学的研究,是研究脊.. 生长条件斑马鱼为热带鱼类,适宜生长水
椎动物器官发育和人类疾病的重要遗传学模型之一温为~℃,最适宜的生长和繁殖温度为.
,。也被用于研究目的基因在,,水的为—。自
脊椎动物中的表达和功能,特别是在母体产生的因来水即可满足要求,但仍需要曝气才能使用周
子如蛋白质和对启动胚胎发育, 寅,张红菱,。斑马鱼为杂食性鱼类,对食物要
、体轴形成机制,、胚层求不高,配合饲料、草履虫、卤虫等就能满足生长繁
诱导与分化,、胚胎中细胞的运动机殖需要。仔鱼先以卤虫和蛋黄作为开口饲料,逐渐
制,、器官形成、左右不添加配合饲料,成鱼主要喂食配合饲料。每天早晚
对称发育机制,、原始生殖细胞起各投料一次,投放饲料量以鱼吃完为宜,不宜
源、增殖和迁移等方面做出了巨大贡献。本文就建太多或太少。斑马鱼对光照的要求较高,一般人工
立斑马鱼胚胎的显微注射基因分析平台等进行了控制以暗、明交替进行。由于斑马鱼代谢
探究旺盛,所以水体中需要有足够的溶氧量以利于斑马
收稿日期:. 接受日期:. 基金项目:国家自然科学基金资助基金号:
并列第一作者通讯作者,—:.
四川动物年第卷第期. .
鱼的生长繁殖。时最好注射到胚胎的动物极细胞中。注射后
.. 选择亲鱼及产卵斑马鱼一般生长~ 的胚胎轻轻转移至盛有预热至℃左右去离子水
周即达到性成熟,在温度和光照合适时,斑马鱼一年的细胞培养皿中,.培养,以利胚胎继续发育。
四季均可产卵。选择活泼、健康的亲鱼,雌雄分开饲
结果
喂~,于产卵前一天的下午,将要用于繁殖的亲
鱼雌雄按:~:比例放入同一鱼缸中进行产卵分别对注射过的胚胎、注射
受精王雪等,。斑马鱼一般凌晨产卵,卵为非过的胚胎和注射过—
粘性沉性卵,在鱼缸中放人滤网箱,将亲鱼放人箱的胚胎在发育至探针的表达变化情况。
内,产下的卵沉