DEAE sephrose FF说明及使用.doc

DEAE琼脂糖凝胶FF的详细资料:英文名称:DEAESepharoseFFCAS号:57407-08-6级别:BR凝胶类型:离子交换填料,弱碱型结构成分:6%交联琼脂糖粒径:45-165μm配基基团:diethylaminoethyl(二乙氨乙基)蛋白质吸附量:110mgHSA/ml凝胶总离子交换量:-:;110mgHSA/mldrainedmedium;100mgα-lactalbumin/mldrainedmedium流速:300~600cm/h;最大流速750cm/h工作PH值:2-9工作温度:4-40℃PH稳定性:1~14(短时间,在位清洗);2~12(长时间)耐压::白色微球,凝胶状、含20%乙醇,底部为乳白色胶体用途:生化研究、适用于各种带负性电荷生物大分子的浓缩纯化等、利用离子交换作用,应用于蛋白等生物分子的快流速高产量纯化等保存:2~8℃包装:100毫升/瓶,500毫升/瓶、1升/瓶等离子交换层析分离蛋白质  【实验目的】通过分离蚓激酶的实验,学习和掌握离子交换层析法的工作原理和离子交换介质的选择;了解离子交换树脂的处理及转型;学习该实验方法的筛选和基本操作技术。 【实验原理】离子交换层析是一种吸附层析,利用不同蛋白质表面电荷的差异而达到分离、纯化蛋白质的目的。阴离子交换剂的电荷基团带正电,反离子带负电,因此这种交换剂可以与溶液中的负电荷化合物或阴离子进行交换反应;阳离子交换剂则反之。 【实验材料】 Tris-HCl 、1M NaCl  Tris-HCl 、蚓激酶粗提物、20%乙醇、1MNaOH、DEAE-Sepharose Fast Flow柱、AKTA purifier 液谱纯化系统、高速离心机、电子天平、试管、一次性滤器、2ml注射器、2ml Eppendorf管、冲洗瓶、玻璃滤器 【实验方法】     1离子交换介质:选用Hitrap DEAE-SepharoseFF阴离子交换层析柱。~,,此时pI<pH,目的蛋白带负电荷,故选择阴离子交换介质。 2 洗脱缓冲液的选择: Tris-HCl 。洗脱液的离子强度及pH可根据具体实验情况而定。一般情况下,起始缓冲液的离子强度应高于10-20mmol/L。 3 样品的准备:。10,000×,取上清进样。 4 进样:将样品加入样品环,输入进样程序。 5 设定洗脱条件 起始洗脱液: Tris-HCl  :1M NaCl  Tris-HCl  :1ml/min , 梯度为0~1M NaCl/20CV  :1M NaOH反洗3CV :20%乙醇4℃保存 【注意事项】