NSCLC中WWOX蛋白、erbB2蛋白的表达及其与细胞增殖之间的关系.doc

NSCLC中WWOX蛋白、erbB2蛋白的表达及其与细胞增殖之间的关系
(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)

作者:刘芳杨翠军李华孙黎
【摘要】目的探讨张家口地区健康中老年人群CYP1A1基因MspⅠ的多态性。方法采用等位基因特异性扩增和聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCRRFLP)技术,分析了360例张家口地区健康成人的CYP1A1基因3′端限制性内切酶MspⅠ位点的3种基因型的分布规律。结果对照组MspⅠ%,%,%,%、%;实验组MspⅠ%,%,%,等位基因T、%、%。结论张家口地区健康老年人群CYP1A1基因存在MspⅠ的多态性,与健康中青年人群没有显著性差异。
【关键词】细胞色素P4501A1;等位基因;基因多态性;MspⅠ
CYP1A1属细胞色素P(CYP)450超基因家族成员,是外源性和内源性化合物在体内代谢的重要Ⅰ相酶之一,参与多种内外源性化学物质的体内代谢过程〔1〕。现今,已发现CYP1A1基因MSP
Ⅰ多态在不同的种族、年龄、民族和地区的分布具有差异,并有报道其多态性与某些癌变的发生相关〔2〕。CYP1A1基因主要分布于肺、肾、胃肠道、皮肤、胎盘等组织中,对内源性和外源性化合物在体内的代谢有重要的作用,主要通过氧化、还原、水解等作用,改变化合物所具有的功能基团,或使其分解。CYP1A1主要参与多环芳烃类化合物(PAH)的代谢,把其代谢为酚类物质活性很强的环氧化物,这些环氧化物在致癌、致突变中都有重要作用〔3〕。本研究采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCRRFLP)的技术,探讨张家口地区健康中老年人群CYP1A1基因MspⅠ多态性分布,以期为本地区癌症的病发提供参考。
1 材料与方法
研究对象对照组随机选择360例无血缘关系的健康张家口地区人员,均在原籍稳定居住2代以上,年龄18~55岁,其中男性186例,女性174例。老年组随机选76名无血缘关系的健康张家口人:年龄60~78岁,平均年龄65岁,其中女性32例,男性44例。经张家口河北北方学院第一附属医院门诊查体健康,无遗传疾病的健康人群。
标本收集从上述人群中均抽取空腹外周静脉全血3 ml,应用赛百盛公司的基因组DNA快速提取试剂盒提取基因组DNA。
主要试剂及仪器引物由北京纽英伦生物公司合成,限制性内切酶Msp
Ⅰ购于北京纽英伦生物公司,德国Eppendorf PCR扩增仪, DYYIII2稳压稳流电泳仪(北京六一仪器厂),纽英伦生物公司的基因组DNA快速提取试剂盒,BioRad凝胶成像分析仪。
CYP1A1 MspⅠ位点基因分型采用等位基因特异性扩增方法PCRRFLP技术为CYP1A1MspⅠ位点基因分型。PCR的反应条件:反应总体积50 μl,含有200 μmol/L dNTP,上游引物序列为5′GCT3′, μmol/L,下游引物序列为5′T3′, μmol/L,模板DNA μg,1 U TaqDNA聚合酶,最后加灭菌双蒸水补齐至50 μl