苦参碱诱导K562细胞凋亡相关基因bcl┐6表达上调.doc

苦参碱诱导K562细胞凋亡相关基因bcl┐6表达上调
作者:张永清黄高升郭英王哲汤苏阳
【关键词】苦参碱;K562细胞
关键词: 苦参碱;K562细胞;bcl-6;凋亡;PCNA
0 引言
自20世纪80年代即发现苦参碱具有抗鼠肿瘤的活性[1] .最近,有人发现它能抑制人红白血病K562细胞增殖[2] ,,苦参碱可诱导K562细胞凋亡相关基因bcl-6表达上调、增殖细胞核抗原(PCNA)表达受抑.

1 材料和方法

细胞培养人红白血病细胞株K562接种于含100mL・L-1 胎牛血清的RPMI1640培养液中,置于37℃、饱和湿度、50mL・L-1 CO2 孵箱内培养,3d换液、传代1次.

药品和试剂苦参碱(matrine)购自西安市天其植物化学药品公司(纯度>,).抗Bcl-6,PCNA单克隆抗体购自D
AKO公司,Western blot检测试剂盒购自德国BOEHRINGER MANNHEIM公司.

苦参碱诱导K562细胞实验将处于对数增长期K562细胞分为7组,分别接种于100mL培养瓶内培养(每组105 个),1组为空白对照,,,,・L-1 苦参碱诱导,每日观察细胞形态,,于-20℃保存备用.
Bcl-6,・L-1 苦参碱诱导组细胞总蛋白提取液定量为1g・L-1 ,各取样品10μL,采用Western blot试剂盒检测,,电子染色,EM-2000EX电镜观察.

2 结果

不同浓度苦参碱抗K562细胞增殖作用苦参碱诱导K562细胞48h后,・L1 以上浓度组细胞均显示出增生明显受抑(P<),细胞数与苦参碱浓度呈负相关(r=-),・L-1 ・L-1 组细胞于第5~・L-1 浓度组出现部分细胞呈葡萄串样聚集,・L-1 时,上述现象更为明显.

Western blot检测Bcl-A结果 Western blot检测显示,对照组Bcl-6阴性,PCNA呈阳性;・L-1 浓度苦参碱诱导K562细胞后,Bcl-6阳性,A检测结果阴性(图1).

苦参碱诱导K562细胞凋亡的电镜观察电镜下见细胞染色质浓集靠边,呈月芽状,一些细胞核染色质和胞膜向细胞外突起,部分脱落形成凋亡小体(图2).
3 讨论
苦参碱是从豆科槐属植物苦豆子、苦参根中分离得到的生物碱,因其具有抗炎、抗肿瘤及抗心律失常等生物学活性而受到关注[1] .我们通过对对照组K562细胞及苦参碱诱导组K562细胞进行计数,一般形态学观察及Western A及Bcl-6蛋白