大鼠胃蛋白酶(pp)酶联免疫吸附测定试剂盒.doc

大鼠胃蛋白酶(PP)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书产品编号:本试剂盒仅供体外研究使用!预期应用ELISA法定量测定大鼠组织匀浆或其它相关生物液体中PP含量。实验原理用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗PP抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗PP抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的PP呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。:一块(96孔)(冻干品):2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为100ng/ml,做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释)后,分别稀释成100ng/ml,50ng/ml,25ng/ml,,,,,样品稀释液直接作为标准浓度0ng/ml,临用前15分钟内配制。如配制50ng/ml标准品:()100ng/,混匀即可,其余浓度以此类推。:1×20ml。:1×10ml。:1×10ml。:1×120μl(1:100)临用前以检测稀释液A1:100稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(100μl/孔),-。如10μl检测溶液A加990μl检测稀释液A的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。:1×120μl/瓶(1:100)临用前以检测稀释液B1:100稀释。稀释方法同检测溶液A。:1×10ml/瓶。:1×30ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。:1×10ml/瓶(2NHSO4)。::(建议参考仪器使用说明提前预热),,:将动物的组织标本先用PBS洗涤,去除多余血液,匀浆化后放在5~10mlPBS中于-20?放置过夜,第二天,经过二次反复冻融破膜,将匀浆物5000xg离心5分钟,取上清即可检测。:请1000xg离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20?或-80?保存,但应避免反复冻融。注:以上标本置4?保存应小于1周,-20?或-80?均应密封保存,-20?不应超过1个月,-80?不应超过2个月;标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。操作步骤实验开始前,各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在37?溶解);试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或