小鼠叉头蛋白p3(foxp3)酶联免疫吸附测定试剂盒.doc

小鼠叉头蛋白P3(FOXP3)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书产品编号:LIFETM供体外研究使用、不用于临床诊断!预期应用ELISA法定量测定小鼠组织匀浆或其它相关生物液体中FOXP3含量。实验原理用纯化的FOXP3抗体包被微孔板,制成固相载体,往微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的FOXP3抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物(TMB)显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的FOXP3呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(值),计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制1、酶标板:一块(96孔)2、标准品(冻干品):2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至1ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为16ng/ml,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成16ng/ml,8ng/ml,4ng/ml,2ng/ml,1ng/ml,,,样品稀释液直接作为空白孔0ng/ml。如配制8ng/ml标准品:()16ng/,混匀即可,其余浓度以此类推。3、样品稀释液:1×20ml。4、检测稀释液A:1×10ml。5、检测稀释液B:1×10ml。6、检测溶液A:1×120/瓶(1:100)。临用前以检测稀释液A1:100稀释(如:10检测溶液A/990检测稀释液A),充分混匀,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(100/孔),-。7、检测溶液B:1×120/瓶(1:100)。临用前以检测稀释液B1:100稀释。稀释方法同检测溶液A。8、底物溶液:1×10ml/瓶。9、浓洗涤液:1×30ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。10、终止液:1×10ml/瓶(2mol/LH2SO4)。11、覆膜:5张12、使用说明书:1份自备物品1、酶标仪(建议仪器使用前提前预热)2、微量加液器及吸头,EP管3、蒸馏水或去离子水,滤纸标本的采集及保存1、组织匀浆:将动物的组织标本先用PBS洗涤,去除多余血液,匀浆化后放在5~10mlPBS中于-20℃放置过夜,第二天,经过二次反复冻融破膜,将匀浆物5000xg离心5分钟,取上清即可检测。2、其它生物标本:请1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20或-80保存,但应避免反复冻融。注:以上标本均应密封保存,4保存应小于1周,-20不应超过1个月,-80不应超过2个月;操作步骤实验开始前,各试剂均应平衡至室温,试剂不能直接在37溶解;试剂或样品配制时,均需充分混匀,混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。1、加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100,余孔分别加标准品或待测样品100,注意不要有气泡,加样时将样品加于酶标板底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37温育2小时。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。2、弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液1