人胃蛋白酶(pp)酶联免疫吸附测定试剂盒.doc

人胃蛋白酶(PP)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书产品编号:LIFE供体外研究使用、不用于临床诊断!预期应用ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中胃蛋白酶含量。实验原理用纯化的胃蛋白酶抗体包被微孔板,制成固相载体,往微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的胃蛋白酶抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物(TMB)显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的胃蛋白呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(值),计算样品浓度。酶试剂盒组成及试剂配制、酶标板:一块(96孔)12、标准品(冻干品):2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至1ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为400ng/ml,将其稀释为200ng/ml后,再做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200ng/ml,100ng/ml,50ng/ml,25ng/ml,,,,样品稀释液直接作为空白孔0ng/ml。如配制100ng/ml标准品:()200ng/,混匀即可,其余浓度以此类推。3、样品稀释液:1×20ml。4、检测稀释液A:1×10ml。5、检测稀释液B:1×10ml。6、检测溶液A:1×120/瓶(1:100)。临用前以检测稀释液A1:100稀释(如:10检测溶液A/990检测稀释液A),充分混匀,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(100/孔),-。7、检测溶液B:1×120/瓶(1:100)。临用前以检测稀释液B1:100稀释。稀释方法同检测溶液A。8、底物溶液:1×10ml/瓶。9、浓洗涤液:1×30ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。10、终止液:1×10ml/瓶(2mol/LHSO)。2411、覆膜:5张12、使用说明书:1份自备物品1、酶标仪(建议仪器使用前提前预热)2、微量加液器及吸头,EP管3、蒸馏水或去离子水,滤纸标本的采集及保存1、血清:全血标本请于室温放置2小时或4过夜后于1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20或-80保存,但应避免反复冻融。2、血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于1000g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20或-80保存,但应避免反复冻融。3、其它生物标本:请1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20或-80保存,但应避免反复冻融。注:以上标本均应密封保存,4保存应小于1周,-20不应超过1个月,-80不应超过2个月;标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。操作步骤实验开始前,各试剂均应平衡至室温,试剂不能直接在37溶解;试剂或样品配制时,均需充分混匀,混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。1、加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100,余孔分别加标准品或待测样品100,注意不要有气泡,加样时将样品