动物源性食品中氯霉素快速检测ELISA方法与研究.pdf

华中农业大学硕士学位论文动物源性食品中氯霉素快速检测的ELISA方法研究姓名:杨丽丽申请学位级别:硕士专业:微生物学指导教师:高志贤20090601动物源性食品中氯霉素快速检测的ELISA方法研究摘要氯霉素(CAP)是一种高效的抗生素,它可以和大多数药物和饲料添加剂混用,在使用过程中稳定,药效不会降低。由于该药物的广泛使用,使其在动物源性食品中的检出率越来越高,许多发达国家相继禁止或严格限制使用氯霉素,但传统的氯霉素残留分析方法需要昂贵的仪器和专业技术人员,且周期长、成本高,不能满足现场和快速检测的要求,建立高效、灵敏、经济的氯霉素残留分析方法是很有必要的。因此,研究用于检测氯霉素的ELISA试剂盒用于食品安全检测,对于保护消费者利益,以及在国际贸易中有重要的意义。本研究对氯霉素人工抗原的合成、抗体的纯化以及ELISA检测方法的建立和优化等进行了研究。采用活性酯法和重氮化法,将半抗原氯霉素与小牛血清白蛋I刍(BSA)和卵清白蛋白(oVA)偶联,经紫外光谱、红外光谱、。运用合成的免疫原()多次免疫动物,采集抗血清,制备出氯霉素多克隆抗体,经ELISA法测定抗体效价可达到1:1000000。采用饱和硫酸铵分级沉淀法对采集的抗血清进行初级分离,后利用自制的免疫亲和层析柱对IgG粗品进一步进行亲和层析纯化,可获得高纯度高特异性的兔抗氯霉素抗体。通过比较不同的酶标记方法,选用混合酸酐法合成酶标半抗原,并用ELISA法确定了偶联后HRP的活性。通过对包被缓冲液、洗涤次数、包被温度、时间、减少非特异性吸附的方法等的筛选,。,,%OVA的PBS溶液作为封闭液,固相包被条件为37℃2h最佳。利用优化后的分析条件和酶标半抗原采用直接竞争ELISA法进行抗体亲和性和特异性研究。通过方阵试验及筛选得到优化浓度组合为:、。—64ng/ml浓度范围内,抑制率与浓度呈线性关系,回归方程为y=+,R2=,IC50=,ICl0=。与其他类抗生素无明显的交叉反应。华中农业大学专业学位硕十学位论文实验中确定了对鸡肉,牛奶和新鲜虾肉中氯霉素的提取方法,据此构建的ELISA试剂盒可用于样品中氯霉素的快速检测。%.%之间,%.%之间。试剂盒性能测试结果表明,其准确性和重现性较好,储存期试验表明试剂盒在4。C下可保存4个月。可用于虾肉,鸡肉,牛奶等样品中氯霉素残留的批量快速,廉价的检测。关键词:氯霉素;多克隆抗体;酶联免疫吸附分析;残留;试剂盒;酶标抗原n动物源性食品中氯霉素快速检测的ELISA方法研究ABSTRACTChloramphenicol(CAP)isabroad·spectrumantibiotictoGram-,,,thestudyonchloramphenicolELISAkitplaysasignificantsocialandeconomicroleforprotectingconsumel"s’interests,,