凯基TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒.doc

凯基TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒————————————————————————————————作者:————————————————————————————————日期: 凯基TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒(通用)(BIOTIN标记POD法,适用于细胞、组织样本)使用说明书一、TUNEL制品说明凯基TUNEL细胞凋亡检测试剂盒是用来检测细胞在凋亡过程中细胞核DNA的断裂情况,其原理是生物素(biotin)标记的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdTEnzyme)的作用下,可以连接到凋亡细胞中断裂的DNA的3‘-OH末端,并可与连接了的辣根过氧化酶的链霉亲和素(Streptavidin-HRP)特异结合,在辣根过氧化酶底物二氨基联苯胺(DAB)的存在下,产生很强的颜色反应(呈深棕色),特异准确地定位正在凋亡的细胞,因而在普通显微镜下即可观察和计数凋亡细胞;由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂,因而没有3'-OH形成,很少能够被染色。本试剂盒适用于组织样本(石蜡包埋、冰冻和超薄切片)和细胞样本(细胞涂片)的凋亡原位检测。本试剂盒特点●操作简便:使用Ready-to-Use型试剂,并配有ProteinaseK和DAB。●高灵敏度:可以单一检出初期的凋亡细胞。●高特异性:能特异性染色凋亡细胞。●快速操作:整体操作约需3小时。●用途广泛:可应用于组织切片、细胞样本等。●方便观察:使用光学显微镜观察实验结果。●高正确性:有阳性对照片的制备方法,,提前准备好相关试剂。,使用前请离心集液。、降低试剂的损耗,建议使用精密度高的进口微量移液枪及枪头。,再分别滴加于各样本片上,避免每个样本单独配制而产生的试剂损耗。,请使用硅烷(Silane)处理的载玻片或采用多聚赖氨酸铺片。-20℃的70%乙醇中放置30分钟或至过夜,以改善细胞的渗透性。,不要直接加在细胞样本上,以防止细胞样本的脱落。,以5分钟清洗3次为标准。,使用前加入PBS配制成20×DAB(10mg/ml)后,按说明书显色使用。二、TUNEL试剂盒组分组份Cat:KGA702 20assaysCat:KGA70350assaysCat:-20℃Biotin-11-dUTP20μL50μL100μL-20℃TdTEnzyme80μL200μL400μL-20℃50×ProteinaseK40μL100μL200μL-20℃Streptavidin-HRP10μL25μL50μL4℃避光DAB2mg5mg10mg-20℃试剂盒以外自备仪器和试剂光学显微镜、37℃孵箱、微量移液器、染色湿盒、盖玻片、载玻片、染色缸。二甲苯、多聚甲醛、PBS、H2O2、TritonX-100、柠檬酸钠、复染染液:苏木素或甲基绿等。三、操作流程概览细胞涂片、贴壁细胞爬片等细胞样本固定样本通透性的促进TdT酶的作用下Biotin-dUTP与样本DNAD的标记反应加入Streptavidin-HRP及底物DAB的显色反应光学显微镜观察 四、检测样本的预处理TUNEL检测时样本的预处理是试验的关键所在,本说明书推荐的条件仅为普遍情况,用户需根椐自已的样本材料及首次试验结果来调整各个条件(参照Page9),如处理时间、处理浓度等,来优化出适合自身样本的试验条件,从而做出客观的试验结果。:,请使用硅烷(Silane)处理的载玻片或采用多聚赖氨酸铺片。,不要直接加在细胞样本上,以防止细胞样本的脱落。,以5分钟清洗3次为标准。、PBS、封闭液、通透液、染色缸需用户自备,请按上述方法配制。五、标记和显色反应操作注意事项:,以5分钟清洗3次为标准。,为了各种反应的有效进行,,请盖上盖玻片或保鲜膜,或在湿盒中进行,这样可以使反应液均匀分布于样本整体,又可以防止反应液干燥造成实验失败。,短暂于冰上保存。不宜长期保存,长期保存会导酶活性的失活。×DAB溶液颜色变深成为紫色,则不可使用,需重新配制。:将切片放入苏木素染液,染色30s-10min(根据样本做适当调整),蒸馏水冲洗干净