菌落总数测定作业指导书.doc

规定菌落总数的测定方法。、原辅材料、流程卫生中菌落总数的检测。,在一定条件下(如培养基、培养温度和培养时间等)培养后,所得每g(mL)检样中形成的微生物菌落总数。,其他设备和材料如下::36℃±1℃、30℃±1℃:46℃±1℃::1mL()、10mL()或微量移液器及吸头。:容量250ml、:::18mm×。%乙醇溶液。:℃高压灭菌15min。:称取25g样品置盛有225mL生理盐水的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1min~2min,制成1:10的样品匀液。:以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成1:10的样品匀液。:10样品匀液1mL,沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀,制成1:100的样品匀液。,制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次,换用1次1mL无菌吸管或吸头。,选择2个~3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液),在进行10倍递增稀释时,吸取1mL样品匀液于无菌平皿内,每个稀释度做两个平皿。同时,分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。~20mL冷却至46℃的平板计数琼脂培养基(可放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿,并转动平皿使其混合均匀。,36℃±1℃培养48h±2。,可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基(约4mL),凝固后翻转平板,。,必要时用菌落计数器,记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位(colony-formingunits,CFU)表示。~300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU的平板记录具体菌落数,大于300CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数;若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板