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[指导]乳酸菌落总数测定11乳酸菌落总数测定(1)实验目的1掌握食品中菌落总数测定的基本程序和要点2学会对不同样品稀释度确定的原则。(2)设备和材料恒温培养箱:36??1?,30??1?。冰箱:2?,5?。恒温水浴箱:46??1?。天平:。均质器。振荡器。无菌吸管:1mL()、10mL()微量移液器及吸头。无菌锥形瓶:容量250mL、500mL。无菌培养皿:直径90mm。pH计或pH比色管或精密pH试纸。放大镜或/和菌落计数器。试管16nmX160nm(3)培养基和试剂平板计数琼脂培养基,%生理盐水:75%乙醇溶液(4)检验程序菌落总数的检验程序见图1。检样25g(mL)样品+225mL稀释液,均质10倍系列稀释选择2个,3个适宜稀释度的样品匀液,各取1mL分别加入无菌培养皿内每皿中加入15mL,20mL平板计数琼脂培养基,混匀36??1?48h?2h培养计数各平板菌落数计算菌落总数报告图1菌落总数的检验程序(5):称取25g样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,8000r/min,10000r/min均质1min,2min,或放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1min,2min,制成1:10的样品匀液。2液体样品:以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成1:10的样品匀液。3用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL,沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀,制成1:100的样品匀液。4按1操作程序,制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次,换用1次1mL无菌吸管或吸头。,选择2个,3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液在进行10倍递增稀释时,吸取1mL样品匀液于无菌平皿内,每个稀释度做两个平皿。同时,分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。2及时将15mL,20mL冷却至46?的平板计数琼脂培养基(可放置于46??1?恒温水浴箱中保温)倾注平皿,并转动平皿使其混合均匀。3待琼脂凝固后,将平板翻转,36??1?培养48h?2h。水产品30??1?3h。如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时,可在凝固后的培养72h?琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基(约4mL),凝固后翻转平板,。,必要时用放大镜或菌落计数器,记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位(colony-formingunits,CFU)表示。2选取菌落数在30CFU,300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU的平板记录具体菌落数,大于300CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数;若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘以,代表一个平板菌