乳酸菌落总数测定11.doc

乳酸菌落总数测定(1 )实验目的 1 掌握食品中菌落总数测定的基本程序和要点 2 学会对不同样品稀释度确定的原则。(2) 设备和材料恒温培养箱: 36 ℃± 1℃, 30 ℃± 1℃。冰箱: 2℃~5℃。恒温水浴箱: 46 ℃± 1℃。天平:感量为 g。均质器。振荡器。无菌吸管:1 mL (具 mL 刻度)、 10 mL (具 mL 刻度) 微量移液器及吸头。无菌锥形瓶:容量 250 mL 、 500 mL 。无菌培养皿:直径 90 mm 。 pH 计或 pH 比色管或精密 pH 试纸。放大镜或/ 和菌落计数器。试管 16nmX160n m (3) 培养基和试剂平板计数琼脂培养基, 磷酸盐缓冲液或 % 生理盐水: 75% 乙醇溶液(4) 检验程序菌落总数的检验程序见图 1。检样 25 g(mL) 样品+225 mL 稀释液,均质 10 倍系列稀释选择 2 个~ 3 个适宜稀释度的样品匀液, 各取 1 mL 分别加入无菌培养皿内每皿中加入 15 mL ~ 20 mL 平板计数琼脂培养基,混匀 36 ℃± 1℃ 48h±2h 培养计数各平板菌落数计算菌落总数报告图1 菌落总数的检验程序(5) 实验进度表 样品的稀释 1 固体和半固体样品: 称取 25g 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内, 8000 r/min ~ 10000 r/min 均质 1 min ~2 min , 或放入盛有 225 mL 稀释液的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打 1 min ~2 min ,制成 1:10 的样品匀液。 2 液体样品:以无菌吸管吸取 25 mL 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶( 瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中, 充分混匀, 制成 1:10 的样品匀液。 3用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取 1:10 样品匀液 1 mL ,沿管壁缓慢注于盛有9 mL 稀释液的无菌试管中( 注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面), 振摇试管或换用 1 支无菌吸管反复吹打使其混合均匀,制成 1:100 的样品匀液。 4按1 操作程序, 制备 10 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次, 换用 1次1 mL 无菌吸管或吸头。 平板接种与培养 1 根据对样品污染状况的估计,选择 2 个~ 3 个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液在进行 10 倍递增稀释时,吸取 1 mL 样品匀液于无菌平皿内,每个稀释度做两个平皿。同时,分别吸取1 mL 空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。 2 及时将 15 mL ~ 20 mL 冷却至 46℃的平板计数琼脂培养基(可放置于 46℃±1℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿,并转动平皿使其混合均匀。 3 待琼脂凝固后, 将平板翻转, 36 ℃± 1℃培养 48h±2h。水产品 30 ℃± 1℃培养 72h±3h 。如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时,可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基(约 4 mL ) ,凝固后翻转平板,按 条件进行培养。 菌落计数 1 可用肉眼观察,必要时用放大镜或菌落计数器,记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位( colony-forming units , CFU )