反相高效液相色谱法测定茶叶中咖啡因的含量.doc

:高效液相色谱仪(日本岛津10AVP型)、溶剂过滤器、样品溶液过滤器、微量进样器试药:甲醇、乙腈、超纯水、咖啡因对照品三、色谱条件色谱柱:C18(250×,5um)流动相:甲醇-乙腈-水=45:10:45(v/v)检测器及检测波长:紫外检测器280nm流速:、:准确称取咖啡因对照品适量,用乙腈:水(1:1);分别移取10μL、20μL、30μL、40μL咖啡因储备液,用超纯水定容至5mL,、、、,备用。:,加乙腈:水(1:1)混合溶剂8mL,超声提取10min,用超纯水定容至10mL,过滤并稀释20倍,备用。:待基线平稳后,分别吸取25μL对照品溶液和样品溶液进样。五、数据处理及计算以对照品溶液峰面积与对应含量绘制工作曲线,根据样品溶液峰面积在曲线上查出其进样时含量,并计算得到茶叶中咖啡因的百分含量。六、?,样品应该如何处理?附:岛津10AVP型高效液相色谱仪操作一、。(脱气机→A泵→B泵→检测器→柱温箱→主控器)。,在计算机上启动化学工作站ClassVP并点击Instrument,输入用户名和密码,点击确定。二、实验参数的设置在Method下,进行操作:,设置所用溶剂瓶中溶剂量后,点击OK;单击高压泵图标,·min-1,梯度洗脱溶剂B(水)0%,×107Pa。,设置柱温箱温度为25℃。,设置检测波长为280nm,,数据采集时间7min。四、。(或单击各图标的on图标启动系统)。,关闭Purge阀。,单击singlerun,进行样品信息编辑。,扳动手动进样阀至Inject位置,仪器自动开始纪录。,按F8停止采集数据。五、、定量分析参数的设定(1)一级校正表的建立①在DataAnalysis界面下,点击File菜单下的LoadSignal,调用低浓度标样的实验结果。②优化谱图:打开Graphics菜单,选择SignalOptions选项,进入SignalOption编辑框,在Range选择中选择UseRange,输入适当的参数。③优化积分:在DataAnalysis界面下,单击Integration菜单,选择IntegrationEvent,选择适当的参数,编辑积分项目