实验4 高效液相色谱法测定茶叶中咖啡因含量.doc

高效液相色谱法测定茶叶中咖啡因含量
一目的要求:
1 学习高效液相色谱定性和定量分析的方法;
2 熟悉高效液相色谱仪的结构;
3 熟悉高效液相色谱分析操作和条件的设置。
二实验原理:
茶叶中咖啡因的含量是衡量茶叶质量的重要指标之一,也具有多种药理活性,咖啡因又名咖啡碱,属甲基黄嘌呤化合物,具有提神醒脑等刺激中枢神经的作用。对于茶叶中咖啡因含量测定的常用方法有紫外分光光谱法,高效液相色谱法。茶叶中的成分较多,色谱法具有分离和检测双重功能,用色谱法更好。目前茶叶中咖啡因含量的测定采用反相高效液相色谱法较普遍。本实验采用紫外检测器,水提取茶叶中的咖啡碱,,%H3PO4:CH3OH(80:20)流动相,检测波长276nm,用咖啡因对照品的保留时间进行定性,用外标法定量。
三试剂和仪器:
LC-2010AHT高效液相色谱仪(日本岛津),自动进样系统和紫外检测器;KQ3200E型超声波清洗器;;TDL-40B离心机。100mL的容量瓶。
对照品工作溶液为:咖啡碱标样,乙醇;磷酸;纯净水;甲醇;茶叶样品
四茶叶样品的处理
准确称取茶叶样品1 g( g)于100 mL容量瓶,加入约70mL纯净水,在超声波中超声20min,平行3份,定容至100mL。,取续滤液与比色管(或者用5000转/min以上的离心机离心15min,取上清液),待用。
五色谱条件(实验时自己记录)
色谱柱:
流动相体系:%磷酸–甲醇(体积比为 80 : 20) (注意:在做样品时用梯度洗涤,咖啡因出峰后用100% CH3OH冲洗7-8min的柱子,%磷酸–甲醇(体积比为 80 : 20)平衡7-8min柱子才能进下一样品)
流速: mL/min 柱温: ºC
进样量:5 µL 检测波长:276 nm
六咖啡因标准曲线绘制和样品测定
用相同浓度的咖啡碱标准溶液,按照下表1中的不同体积进样。
表1 进样体积和峰面积
进样体积(µL)
咖啡碱进样质量(µg)
咖啡碱峰面积A