鸭瘟病毒囊膜糖蛋白gH的原核表达和免疫印迹.pdf.pdf

澎江学J-:矸学2008年第3期鸭瘟病毒囊膜糖蛋白gH的原核表达和免疫印迹金映红,冉多良,叶伟成!,王一成,袁秀芳,卢立志,陈方华’,张存(1、;,}J:)摘要:根据鸭瘟病毒包膜糖蛋白H(gH)基冈序列设计3对引物,PCR扩增的基因片段分别定向插入到原核表达载体pE,构建了3种原核表达质粒pET—gH、pET—gH和pET—gH,并转化宿主菌B(DE,)。结果显示,去除了gH跨膜区和信号肽的gH基因片段(-gH)获得了表达,而全基因片段()未获得表达。。鸭瘟病毒gH蛋白的成功表达,将有助于开展该基因功能的研究和血清学检测方法的建立。关键词:鸭瘟病毒;糖蛋白gH;原核表达’中图分类号:$:A文章编号:(2008)03—0368—04鸭瘟是水禽最重要的疫病之一,鸭瘟病毒又称鸭肠炎病毒(Duckenteritisvirus,DEV),属于疱疹病毒科(Herpesviridae)(),该病毒能引起不同年龄和性别的鸭发病,发病率和死亡率都很高,严重影响了养鸭业的健康发展“。。疱疹病毒囊膜糖蛋白存在于病毒粒子表面,参与病毒吸附穿入过程、病毒诱导的细胞融合过程及病毒从核膜出芽、释放过程等,是感染发病的关键所在,它们在诱导机体的免疫应答作为保护性免疫诱导剂方面的作用也十分重要。gH是能促进病毒与细胞融合的一种囊膜蛋白,并且HSVgH含有多个抗原位点,使gH有很好免疫性。鸭瘟病毒gH基因编码835氨基酸残基J,在体内可诱导产生特异性抗体。在大肠杆菌中高效表达病毒囊膜蛋白抗原存在不表达或表达量低、表达产物无抗原性等问题。本研究在分析DEVgH理化特性和抗原位点的基础上,研究在大肠杆菌的表达,并检验表达产物的抗原反应原性,为研究鸭瘟病毒gH的功能和建立鸭瘟血清学检测方法提供研究基础。,表达载体pET2和大肠杆菌TOP.。、B(DE)均由浙江省农科院畜牧兽医研究所畜禽传染病实验室保存。、;限制性内切酶NcoI、XhoI等均购自上海生工;质粒抽提试剂盒与胶回收试剂盒等购自上海申能博彩生物科技公司;羊抗鸭辣根过氧化物酶标记抗体为KPL公司产品。(Genebank登录号:EF053033),设计3对引物,由上海英骏公司合成。引物1扩增gH全基因片段,引物2和3分别扩增去除gH基因信号肽和3’端跨膜区的不同大小片段。引物1(gH):上游引物为5'-GAA1-I℃AT(GGTGCTAAT-3(含EcoRI酶切位点)下游引物为5'-TCATTC1]A1](gH1347):上游引物为5'-ATGGCGTGGATAGGT收稿日期::浙江省自然科学基金项目(Y306179)作者简介:金