菌落总数测定PPT讲座.ppt

菌落总数测定菌落的概念:菌落(colony)是指细菌在固体培养基上经培养后生长繁殖而形成的能被肉眼所识别的生长物集落,它是由数以万计的相同细菌集聚而成的。菌落总数的定义:样品经过处理,在一定条件下培养后(如培养基成分、培养温度和时间、pH、需氧性质等),所得1mL(g)检样中所含菌落的总数。所得结果包括一群在方法规定的条件下生长的嗜中温的需氧和兼性厌氧菌。卫生学意义:菌落总数主要作为判定样品被污染程度的标志,也可以应用这一方法观察样品中细菌的性质和繁殖的动态,以便对被检样品进行卫生学综合评价时提供科学依据。主要修订内容培养基由营养琼脂改为平板计数琼脂。菌落计数公式进行了修改。添加了关于蔓延菌落的描述。添加了PetrifilmTM细菌总数检验测试片法。添加了拍打式均质器或等效的设备。第一法平板计数法培养基改变情况平板计数琼脂(PCA)胰蛋白胨 1000mL营养琼脂(NA)蛋白胨 1000mL样品处理添加了拍打式均质器或等效的设备关于均质器使用效果和对检测结果的影响,有不同的报道:不同食品样品采用不同的均质方法,测试结果不同。不同的均质方式对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的检测的影响也不同。菌落总数的检验程序图检样10倍系列稀释选择2~3个适宜样品匀液,各取1mL分别加入无菌培养平皿内每皿内加入适量培养基(PCA)菌落计数36±1℃48±2h报告样品的稀释固体和半固体样品:称取25g样品至盛有225mL磷酸盐缓冲稀释液或生理盐水的无菌均质杯内,8000r/min~10000r/min均质1min~2min,或放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1min~2min,制成1:10的样品匀液。液体样品:以无菌吸管吸取25mL样品至盛有225mL磷酸盐缓冲稀释液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成1:10的样品匀液。用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL,沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀,制成1:100的样品匀液。按上述操作制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次,换用1次1mL无菌吸管或吸头。根据对样品污染状况的估计,选择2~3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液),在进行10倍递增稀释时,每个稀释度分别吸取1mL样品匀液于2个无菌平皿内。同时分别取1mL稀释液加入2个无菌平皿作空白对照。及时将15mL~20mL冷却至46℃的平板计数琼脂培养基(可放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿,并转动平皿使其混合均匀。如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时,可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基(约4mL)。