《胚胎工程》综合性实验指导.doc

胚胎工程综合性实验指导书刘玉清陈芳佛山科学技术学院动物医学系2007年3月5日小白鼠鲜胚移植技术一、,增加对胚胎移植技术的感性认识。。二、实验原理早期胚胎在母体子宫输卵管内呈游离状态,通过手术或非手术法用冲洗液冲洗能收集胚胎,收集的正常胚胎如果其发育速度与同种母体受体子宫环境相适应,移植胚胎能继续发育,产生后代。三、实验动物4~6周龄同一品系小白鼠,雌鼠体重20~30g。四、实验仪器与材料搪瓷盘、体视显微镜、倒置显微镜、分析天平、恒温箱、恒温水浴锅、手术剪、眼科剪、眼科镊、手术器械、吸卵管、表面皿、注射器(1ml)、注射针头(4、5号)、鼠笼、PMSG、hCG、75%酒精、麻醉药、PBS缓冲液。五、:第一天下午4:00供体雌鼠腹腔注射PMSG5IU(),第三天下午4:00供体雌鼠腹腔注射hCG5IU(),注射后,雌雄鼠按2:1比例合笼自然交配,第四天上午8:00以前观察雌鼠阴门,见阴栓或阴门紧闭者均可用于采卵,第六天下午和第七天采卵。:用颈椎脱臼法处死小鼠,无菌操作取出输卵管与子宫,冲卵前应将子宫上的脂肪去掉,以免脂肪滴和红细胞影响检卵。用注射器冲卵时,先以5号针头从子宫颈部插入子宫,穿通宫管结合部,再抽回针头,将其在入针处用眼科镊夹住,然后推出冲卵液,接于表面皿内。每侧子宫冲洗10-20滴。:将表面皿置于37温箱内数分钟,让卵自然下沉,而后在解剖显微镜或倒置显微镜下用低倍观察。鼠卵呈圆形,外有透明带。质量优良胚胎处于正常发育阶段,外形匀称;桑葚胚阶段呈多角形分裂球,外形紧密。质量差胚胎,分裂球大小不一,细胞中有空泡,细胞界限不清楚,有颗粒或细胞