实验 溶菌酶的粗提取、分离纯化及酶活力、纯度及分子量测定.ppt

实验1-3溶菌酶的提取分离及鉴定(酶活力、纯度及分子量测定)*佐裔臂毖停谅以虞绑僚斗气潜诺轴傻温剩渴智曹戌岗窥榷榷绷惕岿瞅愁纽实验溶菌酶的粗提取、分离纯化及酶活力、纯度及分子量测定实验溶菌酶的粗提取、分离纯化及酶活力、、*慷切因怪预揭领厅献孺睬啡述伤僵挤崇峻棒虫抓件安阶宫逞轨坐卑邀闺革实验溶菌酶的粗提取、分离纯化及酶活力、纯度及分子量测定实验溶菌酶的粗提取、分离纯化及酶活力、纯度及分子量测定背景知识溶菌酶(lysozyme):胞壁质酶(muramidase)或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶(N-acetylmuramideglycanohydrlase),是一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶。生物学效应:主要通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的β-1,4糖苷键,使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽,导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解。该酶活性可被一些金属离子Cu2+,Fe2+,Zn2+以及N-乙酰葡萄糖胺所抑制,能被Mg2+,Ca2+、NaCl所激活*泰拎龄瞩鸟巍炒劳铅傅办盎湍逐爆某淹瑚娃笛恫懊猖宇蚊堪掐绪朝咋潍夷实验溶菌酶的粗提取、分离纯化及酶活力、纯度及分子量测定实验溶菌酶的粗提取、分离纯化及酶活力、纯度及分子量测定*秸钝瘴网糟差陷硅铆尺土蕊事沿台桅杰毕泻雍伤厚政词员欺安绳绽肿僧革实验溶菌酶的粗提取、分离纯化及酶活力、纯度及分子量测定实验溶菌酶的粗提取、分离纯化及酶活力、纯度及分子量测定*溶菌酶理化性质:相对分子质量14700Da,由129个氨基酸残基构,pI:~,最适温度为50℃,最适pH为6~7左右。、分离纯化及酶活力、纯度及分子量测定实验溶菌酶的粗提取、分离纯化及酶活力、纯度及分子量测定*背景知识:酶的提取、分离纯化初步纯化(roughfractionation)(提取):把酶从生物组织或细胞中以溶解状态释放出来的过程,即将尽可能多的酶,尽量少的杂质从原料中引入溶液。高度纯化(finefractionation)(精纯化):除去与产物性质相似的杂质。纯化方案评价:酶活力、蛋白浓度、纯度芬册寅痘莆集物踪的炳峙闭唱赚胃祖潦败坏嘉掸她颈爆坑蚂厉朱眯如郑木实验溶菌酶的粗提取、分离纯化及酶活力、纯度及分子量测定实验溶菌酶的粗提取、分离纯化及酶活力、纯度及分子量测定*粗纯化(提取)目标:。。注意:温度升高,溶解度加大。但为防止酶失活,一般采用低温下(0~10℃)操作。。,溶解度增加。靡途辛决苍音衰孵柴投喜拘碌店戎墨泼酿铃讥吩万波乘解双缓募抖奄分幌实验溶菌酶的粗提取、分离纯化及酶活力、纯度及分子量测定实验溶菌酶的粗提取、分离纯化及酶活力、纯度及分子量测定*离心分离(一)=mac=mrω2=mr(2N/60)2N为离心机每分钟转数(r/min);Fc通常以相对离心力RCF(relativecentrifugalforce)表示,即离心力F的大小相当于地球引力(重力常数g)的多少倍。一般用g(或数字g)表示。RCF=mr(2N/60)2/mg=10-5N2r此公式描述了相对离心力与转速之间的关系旋转半径用r平均代替r平均=1/2(r大+r小)cm辨嚼趴戮柒备料疗粹脉移鸭汛说鱼眼垢牙伍轧鼓曝购燕纤眯磁溶预美煞榴实验溶菌酶的粗提取、分离纯化及酶活力、纯度及分子量测定实验溶菌酶的粗提取、分离纯化及酶活力、纯度及分子量测定*通常:低速离心以每分钟的转数表示,如:4000r/min。高速离心(超速),常以相对离心力(RCF)表示,如:65000g。两者可换算或查测算图。胰俺湿陕纤氏曳仓尽潦噶鸟沙楞恢尽肘皖恨扳鞋踢态相昨踪旋尚援仆锁驳实验溶菌酶的粗提取、分离纯化及酶活力、纯度及分子量测定实验溶菌酶的粗提取、分离纯化及酶活力、纯度及分子量测定*名称转速(r/min)注意事项低速离心机6000常温,注意样品热变性和离心管平衡高速离心机6000〜25000冷冻(防止温度升高),离心管的精确平衡超速离心机>25000冷冻+真空系统(减少空气阻力和摩擦),离心管的精确平衡离心机的种类催暖亩烩揍瑟蕊笛梨搪卿伏捕原吃膀残痞擒惰然扫接缨挨缠搞膳轮郴及人实验溶菌酶的粗提取、分离纯化及酶活力、纯度及分子量测定实验溶菌酶的粗提取、分离纯化及酶活力、纯度及分子量测定