丁胱亚磺酰亚胺排空组织谷胱甘肽对大鼠肝脏.doc

丁胱亚磺酰亚胺排空组织谷胱甘肽对大鼠肝脏谷胱甘肽系统的影响毛丽娟,上海交通大学体育系,上海,200030,摘要:本部分实验采用长时间力竭运动及注射丁胱亚磺酰亚胺(BSO)排空GSH两种实验模型,比较对照组与注射BSO组SD大鼠在静息状态和长时间力竭运动后GSH状态及其代谢变化。发现注射BSO8天后,大鼠肝脏GSH含量分别为对照组的45%,并且GSH的下降均伴随着GSSG的下降,GSH,GSSG的比值没有显著变化。GSH排空导致GSH代谢酶活性发生适应性变化。注射BSO组肝脏中GPX活性与对照组相比显著下降,P,。注射BSO组与对照组相比,肝脏GGT活性显著增加,P,。注射BSO后肝脏GST活性显著增加,GR的活性没有显著变化。注射BSO抑制γ-谷氨酰半胱酸合成酶(GCS)活性,其mRNA的表达量与对照组比较增加,肝脏注射BSO力竭组的GCSmRNA表达量高于注射BSO组,表明极度排空谷胱甘肽后,GCS表达量的增加可能是机体产生的应激反应。:实验选用纯系雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠32只,体重200,250g,由上海医科大学实验动物中心提供,常规条件下采用分笼饲养,每笼5只,饲料选用国家标准啮齿类动物混合饲料喂养。室温控制在22??2,自由饮水进食。?BSO(SIGMA)?DTNB(SIGMA)?GSH、GSSG(SIGMA)(OPT)-乙基马来酰亚胺(NEM)(SIGMA)、GST、GR、GGT、蛋白定量(考马斯亮蓝法)的活性测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)-540型荧光分光光度计8、721分光光度计(上海第三分析仪器厂)-:对照组(CR)、力竭组(CE)、注射BSO组(BR)、注射BSO力竭组(BE)。BSO(L-ButhionineSulfoximine丁胱亚磺酰亚胺),一种谷氨酰半胱氨酸合酶(GCS)的抑制剂,采用腹腔注射。BSO的用量为:6mmol/kg体重,-,每天分别在8:00AM,5:00PM注射两次,对照组、力竭组注射等量的生理盐水,共8天。在最后一次注药后30分钟,断头处死BR组大鼠,安静状态,断头处死CR组的大鼠。在长时间力竭游泳后,断头处死CE、BE组大鼠,处死后立即取大鼠的肝脏入液氮中保存。:取在液氮中冻存的肝脏以1:10wt/()中融化、剪碎、匀浆(Teflon转头的电动匀浆器)、离心,以上步骤均在0~4?中进行,匀浆液冰育待测。、GST、GR、GGT活性测定采用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒〔4〕-----DTNB测定法〔16〕――――-1200EX型透射电镜观察。,,肝脏中巯基的含量与对照组相比显著下降,P,。进行长时间力竭运动后,注射BSO力竭组巯基的含量与注射BSO组相