实验三 红细胞计数血红蛋白测定及白细胞分类计数上课用.pptx

红细胞计数(一)原理用等渗稀释液将血液稀释并充入计数池后,于显微镜下计数。(二)试剂与器材Hayem液(氯化高汞、氯化钠、结晶硫酸钠)血细胞计数板(三)操作2ml稀释液+10ul血液,洗涤,振荡,混匀,充池,高倍镜计数中央大方格周围四个及中央五个中方格内细胞总数。(四)计算细胞数/5×25×10×200×106=细胞数/100×1012/L(五);;,,红细胞易聚集。(六)临床意义1、增多(1)相对性增多(2)绝对性增多(3)真性红细胞增多症2、减少(1)造血物质减少(2)红细胞破坏过多(3)红细胞丢失过多(4)骨髓造血功能衰竭3、红细胞计数和血红蛋白测定的关系二、血红蛋白测定(法)(一)原理血细胞经血红蛋白转化液溶血后,除SHb外,其他血红蛋白均被高铁氰化钾氧化成Hi,与CN—结合生成稳定的氰化高铁血红蛋白。它的最大吸收峰在540nm,测定A,得血红蛋白浓度。(二)试剂、器材文齐氏液、721分光光度计(三)操作 5ml血红蛋白转化液+20ul血液,振荡,混匀,5min后721分光光度计上测定。波长540nm。转化液调零,1cm比色杯。(四)×64458/1000×251=A×(g/L)2..标准曲线法测定参考标准品的A值,以Hb浓度为横坐标,A值为纵坐标,绘制通过零点的曲线,查表。:K=Hb总和/A值总和Hb浓度=A×K(五),白细胞异常增多,SHb疾病时,测定液体发生浑浊,可增加NaCl,消除影响。,-氧化成CO2和N2,或水解CO32-和NH4+。3、对分光光度计相关参数的校正。(六)方法学评价 该方法结果稳定可靠,操作简便,为标准方法,但有一定毒性。除了该方法外,还有SDS-Hb法和沙利氏法等,但SDS本身质量差异大,摩尔消光系数、标准液有待研究,为次选方法。沙利氏法误差大,已经被基本淘汰。