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罗氏tunel检测细胞凋亡试剂盒说明书注意:Label溶液含有甲次砷酸盐和二氯化钴,严禁吸入和食入。反应悬浮物收集于密闭、不易碎、有明确标识的容器中,按有毒废物处理。试剂盒组成:小瓶/盖子标签内容物1蓝色酶溶液大肠杆菌重组牛胸腺末端脱氧核苷酸转移酶,在storagebuffer中10××50ul2紫色标记溶液在reactionbuffer中的核苷酸混合物1××550ul3黄色转化-POD抗荧光素抗体,绵羊Fab片段,连接有辣根过氧化物酶Ready-to-   需要自己配置的其他物品:除上表所列试剂外,还需准备以下溶液。下表列出每步所需物品概览:, Washingbuffer:磷酸缓冲液PBS*Blokingbuffer封闭缓冲液:溶于甲醇的3%H2O2Fixationsolution固定剂:溶于PBS的4%多聚甲醛,,新鲜配制Permeabilisationsolution渗透溶液:%%TritonX-100,新鲜配制(6) 二甲苯和乙醇(浓度:95%,90%,80%,70%,溶于双蒸水中)Washingbuffer:PBS*蛋白酶K*,不含核酸酶,工作浓度:[10-20ug/ml,溶于10mMTris/HCL中,-8]替代处理方案※渗透溶液:(%Triton1)X-100,%柠檬酸钠的,新鲜配制※胃蛋白酶*(%-%,溶于盐酸中,ph2)或胰蛋白酶*,,不含核酸酶※,ph6, 微球菌核酸酶或DNaseI,重组,级别1*黏附细胞,:PBS*Difficulttissue困难组织塑料容器微波湿盒Citratebuffer柠檬酸盐缓冲液,,:PBS*Tris-HCL,,含3%的BSA*和20% 湿盒Parafilm石蜡封口膜或盖片Washingbuffer:PBS*DABMetalEnhancedSubstrateSet*DAB金属增强底物*或POD底物替代物光镜镜检封固剂   产品概述:特异性:TUNEL反应优先标记凋亡产生的DNA链断裂,从而辨别凋亡与坏死、以及由抑制细胞生长的药物或放射线产生的primaryDNA链断裂实验干扰:假阴性:在某些型式的凋亡细胞中DNA链断裂可能缺失或不完全。空间位阻,如细胞外元件可能阻止TdT到达DNA断裂处。两种情况均能产生假阴性。假阳性:在坏死晚期,可能产生大量的DNA片段DNA链断裂也可能在具有高增殖和代谢活动的细胞中出现。两种情况均能产生假阳性。为确认细胞死亡的凋亡型式,应认真进行每种细胞的形态学检查凋亡过程中产生的形态学改变尤其特征形式,因此,对于可以结果进行解释时,细胞形态评估是一项重要的参数样本:细胞离心涂片和细胞涂片在chamberslides上培养的黏附细胞冰冻或福尔马林固定、石蜡包埋样本分析时间:2-3小时,除外培养、固定和渗透检测次数:一个试剂盒50T试剂盒存储/稳定性:未开封试剂盒储存于-15~-25℃可稳定至标签上标明的效期。试剂储存和稳定性TUNEL反应混合物TUNEL反应混合物应在用前临时配制,不能储存TUNEL反应混合物用前应置于冰上转化-POD一旦融化转化-POD溶液后,应储存于2-8℃(最长稳定6个月)注意:禁止冰冻结冰  优点:优点特点灵敏在单个细胞水平检测细胞凋亡的早期间断特异对坏死来说,优先标记凋亡快速分析时间短(2-3h)简便试剂稳定、优化,没有稀释步骤灵活适合于固定细胞核组织,允许堆积、贮存和转运样本双染可以鉴定细胞凋亡的类型和阶段Function-tested功能检查对于大量的批号来说,每一批号均进行了功能检测  步骤和所需材料:1流程图:、细胞涂片和细胞离心涂片需准备的其他试剂:Washingbuffer:磷酸盐缓冲液(PBS)Blockingbuffer封闭溶液:甲醇稀释的3%H2O2Fixationsolution固定溶液:PBS配制的4%多聚甲醛,,新鲜配制Permeabilisationsolution渗透液:%Triton1)X-%柠檬酸钠溶液中,新鲜配制步骤:下表描述了细胞固定、