沙苑子中沙苑子苷A对照品制备及鉴定.doc

沙苑子中沙苑子苷A对照品制备及鉴定.doc沙苑子中沙苑子昔A对照品制备及鉴定作者:吴文倩刘银芳张娟顾振纶郭次仪刘春宇【摘要】目的建立从沙苑子中制备沙苑子昔A对照品的方法。方法采用大孔树脂富集、聚酰胺柱色谱、硅胶柱色谱和重结晶方法对沙苑子80%乙醇提取物进行分离纯化,通过MS、IR、UV、1H-NMR和13C-NMR进行结构鉴定,通过TLC和HPLC对对照品进行纯度检测。结果从沙苑子中分离、纯化出沙苑子昔A对照品,质量分数>%o结论该方法制备的沙苑子昔A对照品符合中药化学对照品的相关要求,可作为沙苑子药材及其制剂质量控制,以及中药药效物质基础研究用的化学对照品。【关键词】沙苑子;沙苑子昔A;[1],能温补肝肾、固精、缩尿、明目,用于治疗肾虚腰痛,遗精早泄,白浊带下,小便余沥,眩晕目昏;始载于《图经本草》,名为白痪藜。沙苑子主要含有黄酮类、三菇类、有机酸类、氨基酸等。黄酮类成分是沙苑子的主要有效成分,具有许多药理活性。近年来研究认为沙苑子总黄酮可保护大鼠重要器官免受运动损伤,明显提高大鼠的运动能力[2],抑制肝纤维化形成[3],抗肿瘤[4〜6],此外对SHR和RHR[7〜8]有明显的降压作用。但有关沙苑子的质量标准中,由于缺少化学对照品,尚无沙苑子黄酮含量控制指标,2005年版的《中国药典》中沙苑子的质量标准也仅有性状、显微、荧光检测等内容。为了进一步研究和完善沙苑子的质量标准,迫切需要研制一种或多种对照品。沙苑子昔A是沙苑子黄酮的主要特征性成分,且在沙苑子中的含量较高,也是沙苑子保肝抗肝纤维化的主要有效成分之一。本文从沙苑子中提取、分离和纯化沙苑子昔A,制备沙苑子昔A对照品,为制定和完善沙苑子及其制剂的质量标准提供沙苑子昔A对照品。1仪器与材料美国Nicolet公司FTTRMagna-550红外光谱仪(KBr压片);美国VARIAN公司INV0A-400超导核磁共振谱仪核磁共振仪;美国ABIQtrap2000液相色谱一质谱仪;英国MICROMASSGCT0A-T0F高分辨质谱仪;惠普7530-GUV/VIS紫外光谱仪;岛津LC-20A高效液相色谱议,SPD-M20A-极管阵列检测器,;WC-1,显微熔点测定仪。,产地为陕西渭南,;黄酮吸附树脂ZTC-5型(天津正天澄清技术有限公司);聚酰胺(100-200目,浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂);聚酰胺薄膜(浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂);硅胶(青岛海洋化工厂),其它化学试剂均为分析纯。,用10倍量石油瞇回流脱脂,脱脂药粉挥干,用10倍量的80%乙醇提取2次,,过滤,合并滤液,回收溶剂后,加水稀释至3000ml,通过ZTC-5黄酮大孔吸附树脂,依次用水及50%乙醇洗脱,收集50%乙醇洗脱部位,回收溶剂,干燥,即为沙苑子总黄酮(40g)o取总黄酮加水溶解,过滤,经聚酰胺柱层析,用水及不同浓度乙醇梯度洗脱,收集水洗脱部位,上硅胶柱,用醋酸乙酯:甲醇梯度洗脱,醋酸乙酯:甲醇(10:2)洗脱部位析出沙苑子昔A结晶,甲醇进行多次重结晶,得淡黄色针状结晶(700mg),mp