人肺癌相关抗原ALT04ag基因的分子克隆、生物信息分析及其功能的初步研究.pdf

中国协和医科大学
博士学位论文
人肺癌相关抗原ALT04ag基因的分子克隆、生物信息分析及其功
能的初步研究
姓名:陈志华
申请学位级别:博士
专业:肿瘤分子生物学
指导教师:范慕贞

人肺癌相关抗原虻姆肿涌寺生物信息分析及其功能的初步研究中文摘要潜狙芯渴医⒌囊恢昃哂薪细咛匾煨缘目谷朔伟┑タ梗殉晒τ于实验动物体内的肿瘤呈像。此后我们克隆了该肺癌相关抗原牟糠片段并证明是一新的序列,该片段具有一定的转化活性。本文目的于进一步克隆全长,对其结构和功能进行初步分析,以期为肿瘤发生、发展机理的研究提供有用的线索。本文的研究工作主要分以下几方面⒂’法克隆了全长,以生物信息学方法对其进行同源性、分子量、蛋白跨膜区、功能位点、等电点、亲疏水性、蛋白二级结构、抗原决定簇等项的分析和预测。结果显示,全长,编码一氨基酸残基的蛋白,可能为一跨膜蛋白,经基因查询发现与登录号为的序列有一定的同源性。⒐菇ˋ真核表达质粒并转染正常小鼠成纤维细胞J笛证明基因稳定整合的转染细胞增殖速率加快,具有成瘤性。转染后除表达外,还有猰基因表达上调,而一虮泶锉浠淮蟆⒐菇ǚ匆錋真核表达质粒以此转染人肺鳞癌细胞榷ㄕ后引起细胞生长抑制、成瘤性丧失。用基因芯片及—治鼋徊街っ鞣义可下调增殖相关基因、上调生长抑制基因,并影响一些其他相关基因的表达。⒁訢砣朔瘟郯┫赴鸏后抑制细胞生长,诱导细胞凋亡。相关基因表达的检测表明,不仅使肺癌相关抗原虮泶锵陆担铱上碌赴钠渌鲋诚喙鼗颉⒌蛲鲆种苹蚣爸琢鲎R葡喙鼗颉⑸系鞯蛲相关基因,并影响一些其他相关基因的表达。中田协平几医科人学博。㈠卅究生论文
可下调虻谋泶铮⑼ü惴旱骺卦鲋诚喙鼗颉⒌蛲鱿喙鼗蚣捌⒈冉戏匆錋转染的和处理的赴虮泶锉浠卓杉前者发生的表达变化基因有%与后者的表达变化基因重合,而处理细胞后基因表达变化较前者更为广泛。综上所述,我们已获得了人肺癌相关抗原全长,并证明该克隆具有转化活性。该基因可能主要调控增殖相关基因的表达。抑制多胺生物合成他基因起着逆转肿瘤恶性表型的作用。本文结果为阐明肺癌癌变机理提供了新的线索,并为该抗原相关抗体用于肿瘤呈像定位、靶向治疗提供了有力的理论依据,具有重要的理论和实践意义。中国协和医科Р﹟二研究生论文中文摘要
英文摘要.,如,瓾.....甌疪.,,琲瑂..甌瑄中目协和医科人学博合鮢究生论文薨文摘要
瓺%甌甃,.甌甀琤,..琣中国协和医科大学博十研巍生论文英文摘要
肺癌是当今世界各国常见的恶性肿瘤,其发病率呈逐年上升趋势【”。虽然期肺癌患者早期发现并及时治疗后,五年生存率可达%ǎ壳胺伟┑奈迥平均生存率却仅有原因就在于还没有更有效的早期诊断方法和更适合的治疗方法。肿瘤的发生、发展及转移是~个多基因、多阶段的复杂过程【川,究竟哪一个基因更特异绾握业娇刂浦琢龅墓丶方谑枪叵档街琢龅恼锒稀⒃ず笈卸霞治疗的关键问题。肿瘤的诊断和转移预测需要特异的肿瘤标志物。由于尚未发现肺癌的特异抗原,临床诊断肺癌常选用多种肿瘤相关抗原联合检测,如癌胚抗原蛋白、血管生成因子、癌基因,抑癌基因编码的蛋白产物、酶类等但其敏感性、特异性仍不够好。是本实验室建立的一株具有较高特异性的抗人肺癌单抗,它与肺癌细胞、组织反应强,而与其他被检的癌细胞和正常细胞反应为阴性‘。以惶标记注入荷瘤裸鼠体内进行肿瘤放射免疫定位,可见肿瘤处呈像明显,而其他组织、器官无呈像【,可见该抗体对肺癌选择性好、反应性强。然而该抗体所对应的抗原是什么每乖谥琢龅姆⑸⒎⒄沟墓讨衅鹗裁囱淖饔为了探讨这些问题,本研究组又克隆了该抗原牟糠謊危闷转染细胞有明显的肺癌相关抗原表达,并在软琼脂中集落形成能力增强【。为了进一步探讨肺癌相关抗原的结构及其在维持肿瘤恶性表型中的作用,本文拟采用疪姆椒ǹ寺全长,对其进行生物信息学分析。同时构建婧吮泶镏柿#云渥H菊O赴鄄熳H鞠赴鲋城榭觥致瘤性及基因表达的变化。多胺是一类生理性脂肪族有机胺,它们在细胞增殖和分化中起着重要作用。疊等【‘报道了过表达多胺生物合成酶的转基因鼠的癌变作用。本研究室曾以多胺生物合成抑制剂处理经含点突变的基因片段转染的转化细胞,能引起其.┗騧皉鞍妆泶锵碌鳎赴裥员硇湍孀【”】。取的研究同样表明,㊣:跢究生论文前言舌】,
起着协同作用。掣”】也证明促癌剂甿..作用猺转化的鼠细胞使之恶性度增强是通过上调多胺生物合成酶基因的表达。除此之外,等【诙院谏亓鱿赴难芯恐蟹⑾郑种贫喟返纳物合成所引起的该细胞科谧柚秃蚿疌疭表达增加有关。本室既往的一系列工作表明:抑制多胺生物合成可调控多个增殖、凋亡相关基因的表达,抑制肿瘤细胞的增殖并诱导其分化及凋亡,引起肿瘤恶性表型逆转R陨涎芯孔柿媳砻鳎褐琢龅姆⑸⒎⒄辜白R朴攵喟返囊斐T龆嗝芮邢喙兀抑制多胺生物合成可引起肿瘤恶性表