肝脏特异基因LZP的克隆及初步功能研究.pdf

复旦大学
博士学位论文
肝脏特异基因LZP的克隆及初步功能研究
姓名:徐志刚
申请学位级别:博士
专业:遗传学
指导教师:李育阳
20031115
摘要本研究首次从人、大鼠、小鼠中克隆了一个肝脏特异表达的新基因工。人桓目7旁亩量颍嗦个氨基酸。剪接本;大鼠蚨ㄎ辉湃旧宄け鐾庀宰印H恕⑿凋亡较对照都没有发生显著变化,提示虮泶锼降南陆翟诟伟┓⑸基因位于人号染色体长臂区ぴ个外显子和瞿含子。小鼠蚨ㄎ辉湃旧錌个外显子组成,编码鼠、大鼠鞍赘叨韧矗炊瘸ァI镄畔⒀Х治霰砻鱈蛋白含有多个结构域,在其耸且欢涡藕烹模羲嫫浜蟮氖个猯峁域,嗽蚴钦剂私痈龅鞍准负跻话氲耐该鞔峁褂颉;蚝偷鞍仔蛄幸烟峤恢锹己欧直鹞狝人,刊、鼠￡杂交显示工基因是一个肝脏特异表达的基因,在所有被检测的组织中肿橹∈种组织辉诟卧嘀屑觳獾絃基因的表达。而原位杂交实验进一步显示蚴窃诟蜗赴斜泶锏摹基因在小鼠胚胎发育早期就开始表达,其表达甚至早于肝脏分化。尽管主要定位于肝脏细胞核膜上,鞍滓部梢苑置诘窖R豪铩基因在肝癌组织中,无论是水平还是蛋白水平的表达量均显著下降,而这种表达量的下降至少在部分病人中与蚱舳蛹谆降募忧坑忻芮械墓叵怠H欢琇表达质粒转染肝细胞株癝玫轿榷ū泶風蛋白的克隆,其增殖、细胞周期、可能并不起非常重要的作用。总之,现阶段得到的数据提示鞍鬃魑R桓龈卧嗵匾斓鞍祝赡茉诟脏的功能及发育中起重要的作用。而且在几乎所有已检测的肝癌病人中显著下调,加之能够分泌到血液中,便于检测,因此有望成为新的肝癌临床检测关键词:伟⒂置冢俅布觳庵副∈驦,以及笫驦指标。,复旦Р┦垦宦畚
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最近又发现返母谋溆敫伟┑姆⑸泄兀猛分械牧疲甤和研究表明,肿瘤中发生突变的基因数目是非常有限的,但许多信号通路相关的基因表达改变与突变没有关系,如在包括肝癌在内的许多肿瘤中存在抑癌基因的发生、发展提供重要线索。近年来,在转录组水平进行表达谱研究的方法被广鹊取俊9胰死嗷蜃槟戏街行母伟┛翁庾槔所认识俊,龌虼6哉庑┦菀约袄醋杂赾⒄罅性咏凰玫氖原发性肝癌琀浅<亩裥灾琢鲋唬浞布具有地域性,高发于东南亚及非洲。在全世界每年新增约万病例中,亚洲占了三分之二,其中中国占了近一半【俊8伟┰谥泄小⑴远裥灾琢鏊劳雎中分别排第二和第三位。流行病学及实验资料表明肝癌的影响因素包括乙肝病毒及丙肝病毒的感染,肝硬化,黄曲霉素的摄入等等【】。除了已经知道癌基因猰和,抑癌基因琑蚿坞摺坝敫伟┑姆⑸喙刂狻—浚基因在部分肝癌病人中检测到突变【】。然而,其它已知抑癌基因的体细胞突变和癌基因的功能改变在肝癌研究中却鲜见报道,肝癌发生发展的具体分子机制仍基因的表达水平却可能会因此受到影响,继而导致基因转录表达调控异常,这种异常基因转录表达调控状态对于肿瘤恶性表型的出现/维持可能又是必需的。另外,表观遗传学难芯勘砻鳎行矶嘤胫琢龇⑸⒄姑芮邢喙启动子甲基化引起的失活。所以,在转录组水平研究人类肿瘤将为深入理解肿瘤泛应用于肝癌研究,象表达序列标签庑颍⒄罅约庑颍琈岷螻攵縍确椒ǎ訦阳性肝癌患者的肝癌/癌旁组织基因表达谱进行了研究,以期在转录水平对肝癌的发生有在这项工作中,四例粜愿伟┗颊叩母伟┡缘攘縫分别混合后构建肝癌/癌旁文库,随机测序得到约蛱鮁序列,整合为进行分析,首先获得了肝癌/癌旁组织的基因表达目录,经比较共获得基因/作为肝癌/癌旁组织差异表达的候选基因/。部分基因/的表达差异然不十分清楚。基因芯片日复旦大学博士学位论文
用半定量在对肝癌,吲宰橹薪辛搜橹ぁ5玫降氖菹允居辛嚼一个肝脏特异表达的小鼠叨韧矗虼丝赡艽砹艘桓龈卧嗵匾明它编码一个含透明带结构域的蛋白,因此命名为基因表达发生明显改变。第一类主要涉及那些肝功能和/或肝细胞分化相关的基因,如涣姿峁羌っ敢籰的表达水平在肝癌组织中明显增高。第二类调变的基因涵盖了细胞增殖、分化和凋亡控制的相关基因。许多参与细胞周期调控的基因,如细胞周期素赴芷谒匾览敌约っ约跋赴芷诘母旱节因子等的表达在多数病例中失调。猵—藕糯ǖ纪泛虳复制相关酶类的表达紊乱可能对肝癌的发生、发展也有贡献。除了上述表达水平异常的已知基因之外,我们还发现了一些表达改变的,它们所代表的基因可能与肝癌的发生、发展密切相关。如在多数肝癌病例中过表达且定位于肝癌染色体扩增区域的淼幕蚩赡则被定位于染色体杂合性缺失区域,是一个候选抑癌基因。这些所代表的新基因的克隆以及它们在肝癌发生及发展中的具体作用还在研究在这些表达改变的校幸桓鯡在癌旁库中测到次,在肝癌库中测到危崾靖没蚩赡茉诟伟┳橹斜泶锵陆怠8肊和表达的基因。通过克隆得到该杂虻娜ǔ蛄蟹治霰。本论文即对该基因的克隆、基因和蛋白特性及其与肝癌发生的关系做一简要介绍。就