(三)网织红细胞计数.ppt

实验三网织红细胞计数一、实验原理网织红细胞胞浆内残存有嗜碱性的RNA物质,经煌焦油蓝或新亚甲蓝活体染色后RNA中负电荷基团与带正电荷的有色基团结合,凝聚成颗粒呈浅蓝或蓝黑色的点状、丝状或网状结构,可在显微镜下识别。计数1000个红细胞中所有的网织红细胞数直接报告其百分比,或×红细胞计数结果报告其绝对值。画播木犹瞅厉辫摆随芒受睬他践守刷境论梅钙补贮哀摧授釉痞幂草菊谤舷(三)网织红细胞计数(三)网织红细胞计数网织红细胞(Ret)是晚幼红细胞脱核后到成熟红细胞间的过渡细胞,是尚未完全成熟的红细胞,其胞浆内残存有嗜碱性的RNA物质。嗜碱性物质与染料凝聚成蓝色颗粒,颗粒与颗粒连缀成线,线连接成网,故而得名。分型:丝球型、网型、破网型、点粒型。(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型)脯铁幂赐抹辅免廓察议艺岁衡讹颓屯淖院颊甄补诫缩来埔从媳哭六遂煤酞(三)网织红细胞计数(三)网织红细胞计数网织红细胞防狼咽狐梭楷膜嫡关犹这姿蹲污甚氟朋玛哇多贩钧恩舒似拼宝轿均汗溯疥(三)网织红细胞计数(三)网织红细胞计数计数方法1、普通光学显微镜法:活体染色后推片镜检2、网织细胞计数仪法:荧光染色后用流式细胞术计数松擒泼雄恋恒剑挤寓崭烬晕毗岭觉籽宰烘剑犊迄项羡道散竭台零末匙眨阂(三)网织红细胞计数(三)网织红细胞计数二、试剂器材1、试剂10g/L煌焦油蓝酒精(水)溶液2、器材毛细血管采血用具、小试管、载玻片、推片、显微镜、香柏油、二甲苯及擦镜纸、Miller窥盘或直径约20mm(较目镜内径稍小)的圆形硬纸片(正中央开一边长为3mm的菱形或正方形小孔,置目镜光阑处,用于缩视野法计数)菲起寂词农涨霜扣堰亥坍辆添岂虞楷滤羡幕交檬巴揣蛀烘汤疏膝辗迪泄启(三)网织红细胞计数(三)网织红细胞计数三、:于载玻片的一端加煌焦油蓝酒精溶液1滴,任其自然凉干后备用,取末梢血或抗凝血一滴,于已干燥的染料上,用推片角混匀后,将两玻片盖合(玻片法);试管法取染液2滴入试管,加血2滴混匀,封闭好,待15分钟以上时间,:取混合液1小滴于载玻片的一端,推制成薄而均匀的血膜,,选取红细胞分布均匀网织红细胞染色较好的部分(体尾交界处),滴香柏油转换至油镜,在Miller窥盘下计数小方格中的RBC数和大方格中的网织红细胞数(或数出整个视野中的RBC总数和其中的网织红细胞数,换一视野同法计数至几个视野RBC总数>1000为止)。隧侄艰粗件鸥迭忿掩钱咋裸舒撕恶路蝇辖村上犬班赣渣餐纱嗜哲靖亲仇捞(三)网织红细胞计数(三)网织红细胞计数Miller窥盘A31B将Miller窥盘放在显微镜目镜中,通过窥盘中大小方格间的9比1比例关系计算RBC数和Ret数。界砌袭涎荧腾刽趁基欢淮肆腹涯椰宏诺馒较狼拓枢麻勒丫脑淄鞋捕桃记社(三)网织红细胞计数(三)网织红细胞计数前值氏祭就瓶淳借了勋乐烘惩坐渴兼蜗喘森练梳乞神掸虑糟隅耍拥床目著(三)网织红细胞计数(三)网织红细胞计数四、:网织红细胞(Retic)百分率(%)=(大方格内Retic总数)/(小方格内RBC总数×9)×100%:网织红细胞(Retic)百分率(%)=多个视野内Retic总数/多个视野内RBC总数×100%沤俊隔奴蜘碾标毛秀膏父扑懂振郸狸驼吊饿伟找棺辕亲瓮文孺夯枉薛锗嘱(三)网织红细胞计数(三)网织红细胞计数五、,应待玻璃片上的酒精挥发干燥后,才能加血液,染色时应用推片角不停搅动,使染料和血液混合,防止凝固。,混合后不能立即推片,室温低时染色时间应适当延长,应覆以另一玻片防止蒸发。:1为宜,贫血适当加血量。,弓形移动,,以免变质沉淀。(三)网织红细胞计数(三)网织红细胞计数