层析分离法.pptx

2020/2/28第九章层析分离法2020/2/(硅胶、氧化铝和活性炭等)。根据试样的性质、吸附剂的活性和流动相的极性这三种因素来选择适宜的条件。被分离的组分极性较强,应选择吸附性能较弱的吸附剂,同时选择极性较强的洗脱剂;或反之。吸附柱层析法可用于芳香族化合物的分离、倍半萜类烯物的分离等。2020/2/。对具有不同相对分子质量的溶质或不同大小的分子进行分离纯化的一种方法。凝胶:葡萄糖凝胶、聚丙烯酰凝胶、琼脂糖凝胶、聚苯乙烯凝胶和多孔硅胶等。分离原理:当被分离的物质通过柱子时,小分子可以自由进入凝胶孔道(kd1),在柱内停留时间最长;大分子因不能进入孔道(kd0),在柱内停留时间最短;居中分子(kd0~1),它们将按照顺序被洗脱。2020/2/28凝胶柱层析法应用生化领域,如蛋白质、氨基酸、核酸、肽类等生物物质的分离和制备;抗菌素的分离、纯化,肝炎病毒的分离等;高聚物的相对分子质量和分子质量分布测定。2020/2/(planarchromatography)主要包括薄层层析法和纸层析法两大类。薄层层析:将固定相涂布于平面载板上。纸层析:直接以滤纸作为固定相。装置简单、操作简便。常作为一种不挥发高沸点有机物、生物大分子混合物的有效、快速、简便的分离分析手段而被应用。平面层析法与其他色谱分离有着相同或相似的分离机理。2020/2/28平面层析法纸层析和薄层层析流动相的移动是依靠毛细作用。将试样点在色谱滤纸或层析板的一端,并将该端浸在作为流动相的溶剂(常称之为展开剂)中,随着溶剂向上的移动,经过试样点时,带动试样向上运动。2020/2/。按需要剪裁成长条形(或筒形)。层析板是用专门的涂布器把浆状的吸附剂(硅胶或氧化铝,200~250目)均匀地涂在长条形玻璃板上(~)。干燥后即可使用。2020/2/。如用纸层析分离氨基酸时,常用的展开剂组成和配比为正丁醇﹕乙酸﹕水=4﹕1﹕1。2020/2/。试样点的直径一般应小于5mm。可并排点多个试样同时展开。2020/2/、检测有些组分在紫外光照射下产生荧光,可在紫外灯下用铅笔将组分斑点描绘出来。常用的显色方法有喷洒显色剂、碘蒸气熏或氨水熏等。