果蝇cox-r条件性基因打靶载体构建.pdf

}￡窖;.erConstructionoftargetingvectorforconditionalknockoutofDrosophilaCOX-RAThesisSubmittedfortheDegreeofMasterCandidate:YuanYayanSupervisor:,China咖0M3ⅢY湖北大学学位论文原创性声明和使用授权说明原创性声明本人郑重声明:所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。论文作者签名:日期:po年6耘瞄徽月l7日学位论文使用授权说明本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,即:按照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本;学校有权保存并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,并提供目录检索与阅览服务;学校可以允许采用影印、缩印、数字化或其它复制手段保存学位论文;在不以赢利为目的的前提下,学校可以公开学位论文的部分或全部内容。(保密论文在解密后遵守此规定)日期:仞/。川67日鞭舭弦6|7,摘要果蝇是一种有着丰富遗传学表型的模式生物,经常被应用于基因功能的研究中。本实验室在1991年,从野外采集的黑腹果蝇自然种群中发现了一只黑色雌蝇,并由此建立了单雌系,其后代连续14代互交,因为背甲的颜色特点,将此突变体命名为黑条体(blacks护P口屯,BSR)。在对黑条体的研究中发现了其与野生型比较缺失了一段40bp的DNA片段,且与功能未知基因CG31007重叠,将该基因命名为COX-R。,发现其在幼虫中的表达量明显低于在蛹和成虫两个时期的表达量,而在头和身体的表达量相同。在此基础上利用生物信息学方法和多种亚细胞定位预测软件对基因CG31007编码的蛋白产物进行亚细胞定位预测分析,其定位于线粒体的可能性最大,因此该基因在色素形成中极有可能扮演重要角色。为了最终清楚果蝇中COX-R基因的功能,需要采用更精确的手段来验证。因此,本实验以果蝇突变体一黑条体的基因组DNA为模板,扩增包括COX-R基因在内的上下游同源臂序列,通过引入LoxP和Neo基因等步骤,以构条件性敲除COX-R基因的打靶载体。并经多个限制性核酸内切酶酶切鉴定和测序,●尼基因条件性打靶载体符合设计要求。该打靶载体的构建,为建立COX-R条件性基因敲除果蝇模型奠定基础。关键词:黑腹果蝇;黑条体;基因C0啊R;基因CG31007;,,,whichoverlapwithunkownedgeneCG31007infunction,thegenewasnominatedasThetemporalandspatialexpressionofCG31007werestudiedinthreedifferentdevelopmentstage,thatarelarve,pupleandadult,theresultsindicatethattheexpressionlevelofgeneCG31007inlarvestageislowerthanthatinothers,butissameinadult’,throughbioinformaticswaysandmultipleproteinsubcellularlocationsoftware,thesubcellularlocationpredictionanalysisoftheproteinproductofgeneCG31007Wasmade,itispossiblethattheproductWaslocatedinthemitochondrion