土壤脲酶活性的测定.docx

靛酚蓝比色法测定土壤脲酶的活性一、实验原理靛酚蓝比色法的基本原理是:被测物浸提剂中的NH4+,在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚反应,生成水溶性染料靛酚蓝,其深浅与溶液中的NH4+-N含量呈正比,~。靛酚蓝反应原理如下:NH3+OCl——NH2Cl+OH-三、实验试剂10%尿素:称取10g尿素,用蒸馏水溶至100ml。柠檬酸盐缓冲液(PH=):。将两溶液合并,用1mol/,用水稀释至1000毫升。苯酚钠溶液():,,用无水乙醇稀释至100毫升(A),存于冰箱中;27克NaOH溶于100毫升水(B)。将AB溶液保存在冰箱中。使用前将2溶液各20毫升混合,用蒸馏水稀释至100毫升。次氯酸钠溶液:%,溶液稳定。(9ml—100ml中)氮的标准溶液():,。甲苯四、,摇匀。从其中分别吸取0,,,,,,加水至20ml,再加入4ml苯酚钠的溶液,充分混合。紧接着加入3ml次氯酸钠,随加随摇匀,放置20分钟,用水稀释至刻度。将显色液在可见分光光度计上于578nm处,以1cm比色皿进行比色测定,以试剂空白为参比。以标准溶液氮含量为横坐标,以吸光度值为纵坐标绘制标准曲线。,向其中加入1ml甲苯,以使土样全部湿润为宜。放置15分钟后,加入10ml10%尿素溶液和20ml柠檬酸缓冲液(pH=),并摇匀。将锥形瓶放入37℃恒温箱中,培养24h。培养结束后,用热至38℃水稀释至刻度,充分摇荡,并将悬液用滤纸过滤到锥形瓶中。设置有土无基质对照,即考察各种溶液和土壤中氨氮存在带来的影响。相当于其他实验中所做的空白对照。分别吸取(1-3ml)滤液于50ml容量瓶中,加蒸馏水至20ml,充分震荡,然后加入4ml苯酚钠,充分混合,再加入3ml次氯酸钠充分摇荡,放置20分钟,用水稀释至刻度,溶液呈10现靛酚的蓝色(在1h内保持稳定)。在分光光