分泌型Survivin真核表达载体的构建及其在HeLa细胞中的表达.pdf

第卷第期暨南大学学报医学版. .
年月.
分泌型真核表达载体的构建及其
在细胞中的表达
韩捷, 施焕敬, 徐丽慧, 卢宏松, 何贤辉
;.生物工程研究所,广东广州
摘要目的:构建含个组氨酸标签的小鼠存活素融合蛋白的真核表达载体,及其在真核细
胞中的表达。方法:根据小鼠序列设计引物,经过克隆的并进一步构建分泌型
的真核表达载体,经测序鉴定后在大肠杆菌中扩增在细胞中表达;以金属离子螯合层析富集,再用免疫
印迹法鉴定。结果:克隆到编码区全长序列,经测序后证明与已报道序列相同。构建氨基端融合小
鼠信号肽,羧基端带有标签的融合蛋白的真核表达载体,在细胞中转染成功并且表达;细
胞上清经柱层析富集后,进行免疫印迹分析,表明该融合蛋白以分泌型方式在细胞中表达。结
论:成功克隆的,并构建其分泌型真核表达载体。
关键词存活素; 真核表达; 分泌型; 肿瘤相关抗原
中图分类号. 文献标识码文章编号———


, , —, ., —
.;.,
,,,
:
. :
,—.
. ,.
.—
.:
.—

.
【收稿日期】—
【基金项目】国家自然科学基金项目、和;生物化学与分子生物学广东省重点学科资助项目
作者简介韩捷一,男,硕士研究生,研究方向:免疫调节与免疫药理
通讯作者:何贤辉。:—;·:..
第期韩捷,等:分泌型真核表达载体的构建及其在细胞中的表达
,.
:,—
.
.
; ; ;
存活素是由等¨于
材料与方法
年发现的凋亡抑制蛋白.
,家族成员,由个氨基酸组成,相对分. 材料
子质量为的胞浆蛋白;在细胞分化和存活等大肠杆菌购自公司;—
方面起调控作用,在正常成人的胸腺、血管内皮细购自;限制性内切酶、、、
胞、睾丸和分泌期子宫内膜仅少量表达,高表达连接酶、高保真聚
于各种胚胎组织,而在各种恶性肿瘤如肺癌、结合酶、蛋白质分子量标准均为产品;引
肠癌】、乳腺癌】、皮肤恶性肿瘤等过量表达。物见表全部由上海英骏生物公司—
此特性使成为肿瘤治疗的理想标靶。利用合成。
突变体和特异性抗体标记的肿瘤免疫治疗, 和为德国
激发特异性免疫应答最有效的方法之一是公司产品;—载体购自
利用转染表达的突变体的树突状细胞公司;为公
, 。最近,研究显示转染人或小司产品;
鼠的疫苗能诱发有效抗肿瘤免疫及应预染蛋白分子质量标准为公司产品;
答。.
未见报道。本研究在克隆小鼠的公司产品;辣根过氧化物酶标记羊抗
后,进一步构建分泌型突变体蛋白的真核鼠抗体为北京中杉进口分装。
表达载体并在细胞中转染表达。
表构建表达载体所有引物序列

..
.一
一田卫℃.
.
..
.℃.
.

. 方法变性,℃退火,℃延伸,共个
小鼠全长编码区的克隆循环,再《延伸,并以.
参照中登记的小鼠基因序列从琼脂糖凝胶中回收。胁柑
登录号:设计引物和引物。一双酶切并再次从凝胶中回收,与经
总体系为,以小鼠脾脏的为模板,条双酶切的—载体连