超氧化物歧化酶(SOD) 活性测定.ppt

超氧化物歧化酶(SOD) 活性测定(NBT 法) 一、测定意义二、目的要求三、原理四、仪器设备五、试剂配制六、植物材料七、操作步骤八、结果计算九、注意事项十、思考题一、意义: 细胞内自由基的产生和消除处于动态平衡状态,自由基水平很低,不会伤害细胞。植物正常情况下植物逆境胁迫下 O -.2、H 2O 2、OH ·的产量增加; SOD 、CAT 、POD 活性降低; VtE 、VtC 、CAR 、GSH 含量降低; 从而伤害细胞。植物体内活性氧代谢系统的平衡被打破什么叫逆境? 逆境是指对植物生存生长不利的各种环境因素的总称. 逆境的种类? 为什么要测定完全液和缺素苗的 SOD 活性? 二、目的要求: SOD 活力测定的实践意义; SOD 测定的原理及操作要点; SOD 活性的差异。三、原理: 三、原理: 依据 SOD 能抑制氮蓝四唑( NBT ) 在光下的还原作用来确定酶活性大小。在有氧化物质存在下, 核黄素可被光还原,被还原的核黄素在有氧条件下极易再氧化而产生 O 2 .-, 可将氮蓝四唑还原为蓝色的甲腙,后者在 560 nm 处有最大吸收。而SOD 可清除 O 2 .-, 从而抑制了甲腙的形成。于是光还原反应后, 反应液蓝色愈深,说明酶活性愈低,反之酶活性愈高。据此可以计算出酶活性大小。四、仪器设备研钵;玻璃试管; 40 W荧光灯; 移液管等。五、试剂配制 1、提取介质─50mmol/L() 磷酸缓冲液。 2、反应介质─50mmol/L() 磷酸缓冲液, 内含 μmol/L 硝基四唑蓝, mmol/L EDTA, 蛋氨酸。 3 、 μmol/L 核黄素溶液: 用含有 mmol/L EDTA 的 50mmol/L() 的磷酸缓冲液配制。 SOD 反应混合液 ml反应介质 ml μmol/L 核黄素溶液六、植物材料:玉米叶片: 完全液培养苗缺素液培养苗