Sp1基因沉默对前列腺癌细胞CD59表达调控的作用的研究.pdf

虺聊郧傲邢侔┫赴鸆泶锏骺氐淖饔醚芯中文摘要硕士研究生梁岩庖哐指导教师高美华教授关键词;黄舳樱徊固澹扇牛磺傲邢侔研究背景:前列腺癌谂访婪⒉÷始ǜ撸昀矗孀湃丝诶狭化、生活环境和饮食习惯的改变,前列腺癌在我国发病率呈明显上升趋势。前列腺癌大多为腺癌,常从前列腺的外周发生,最终经局部、淋巴和血行扩散转移。该肿瘤发病隐匿,早期很难察觉,分子生物学方面的研究已经成为发现、诊断、治疗该疾病的热点。广泛分布于造血细胞及多种组织细胞表面,保护宿主细胞免受补体攻膜复合物的攻击。近年来,国内外研究发现在多种实体肿瘤细胞中分子高表达,推测可能与肿瘤的发生、发展有关,但其发生机制尚不明确。生物信息学分析,启动子区域没有典型的盒和校ǜ缓珿校渲幸的碱基序列是启动子的关键部位,生物信息软件分析结果显示此部位正是转录因子匾煨缘厥侗餑的位点。盒有很强的亲和力,与许多靶基因的启动转录有关,在细胞增殖、凋亡、分化和肿瘤形成等过程中起非常重要的作用。研究发现,弑泶镉胛赴⒁认侔傲邢侔┑亩裥猿潭瘸收相关,与患者的生存期呈负相关,是影响患者预后的重要因素。因此,以蜃魑7肿影标,有望为肿瘤基因治疗开辟一条新途径。目的:构建针对騭真核表达载体,转染前列腺癌细胞一研究反式作用因子訡泶锏牡骺刈饔谩方法:应用泶镌靥褰榈嫉腞际酰菇ê匾煨許基因的重组载体,经脂质体法转染前列腺癌细胞,筛选稳定表达转染该基因的阳性细胞克隆,荧光倒置显微镜下观察转染效率,及检测转染细胞中虲虻谋泶锴况,流式细胞术检测的表达,叭玖鲜头攀匝榧觳釩蛞种坪笾琢鱿赴圆固溶破的抵抗作用。结果:成功构建了騭真核表达载体,.转染细胞后,虲騧表达量均明显降低,流式细胞仪检测分子的表达减少,和染料释放实验表明基因受抑制后肿瘤细胞对补体溶破的抵抗作用降低。结论:刈樵靥逵行У匾种屏薈谋泶铮档虲目共固寤钚裕峁っ鞣式作用因子荂泶锏骺刂兄匾5淖B家蜃樱醚芯课狢谥琢鱿赴懈弑泶锏姆子机制提供了新思路,将为肿瘤基因靶向治疗开辟一条新途径。
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主要仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”质粒、菌株⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一主要实验试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯载体的选择⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯方法扇牌蔚纳杓啤寡核苷酸链的退火⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”质粒的双酶切⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·琼脂糖电泳分离大分子片段⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”大分子片段的回收⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯寡核苷酸与载体的连接⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯重组载体转化一感受态大肠杆菌法高纯度质粒的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯重组质粒的鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.重组质粒的酶切鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”.测序结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”第聀H綪赴許及表达的抑制作用材料.
主要仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”细胞株⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.—觳釹、表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”—觳獍谢騍、相对表达水平的变化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯第耂基因沉默对前列腺癌细胞中生物学行为的作用材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯ú舛≒⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”
综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯“参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..攻读学位期间的研究成果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯¨附录瓹舳瓹舳臃治觥刈橹柿鉴定序列⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”刈橹柿庑颉致谢⋯⋯⋯⋯⋯