包虫病诊断标准附录c.doc

包虫病诊断标准附录c包虫病诊断标准附录C包虫病诊断标准附录C:免疫学诊断方法人体包虫病免疫学诊断方法有间接红细胞凝集试验(IHA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、PVC薄膜快速ELISA等。其中,以ELISA法最为常用且较敏感。现有的包虫病免疫学试验方法在敏感性和特异性上存在很大的差异。试验结果受许多因素的影响:抗原的性质和质量;检测用的试验系统;棘球蚴囊的数量、部位和活力;不同地理虫株差异;个体免疫应答反应的差异等。约10%,40%的手术确诊的包虫病患者用目前已知的抗原检测不到特异性抗体。本规范中列出了国内外普遍应用的一些方法。:完整的棘球蚴组织表面清洗干净消毒后,无菌抽取囊液(宜使用无化脓和无钙化的可育囊)。将囊液经5000r/min离心20min,上清液冻存备用。、氯化镁沉淀法对棘球蚴囊液抗原进行部分纯化。取20ml离心后的囊液上清,加入2mol/LMgCl2和4%磷钨酸(,);室温搅拌5min,5000r/min离心30min;;4oC透析24小时,测定蛋白浓度,,20oC冻存。(ELISA)、纯化抗原、特异性抗原。:,每孔加入100mu;l,置温盒4?过夜。次日,倾去抗原,%吐温,20的磷酸盐缓冲液(.4PBST)洗涤3次,每次3min,拍干;:血清用含3%BSA的PBST1?200稀释,每孔加入100mu;l,每板应设参考阳性一孔,参考阴性三孔及PBS对照一孔。置温盒,37?1h,取出倾去血清,同前洗涤3次;:加入工作浓度的辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗人IgG100mu;l,37?,1h,倾去第二抗体,同前洗涤;:加邻苯二胺(OPD,橙红色)或四甲基胺/四甲基联苯胺硫酸盐(TMB/TMBS,蓝色)底物溶液100mu;l,37?,30min;:2mol/;(OPD)或450nm(TMB/TMBS)吸光值,以待测样本(S)对阴性对照血清(N)的S/Nge;。(IHA),加入200ml,400ml阿氏液(、、,,高压或过滤除菌)中,混匀抗凝。3000r/min离心15min,弃上清;,同上离心。沉淀中加入50ml生理盐水和100mlPBS(,)混匀;%Na2CO3中和的戊二醛300ml(10%Na2CO375ml与25%戊二醛225ml混合)于磁力搅拌器4?缓慢搅拌24h;+离心弃上清,沉淀用生理盐水洗涤5次。最后,%NaN